[发明专利]一种基于LAMP技术的番茄细菌性溃疡病的检测方法无效
| 申请号： | 201310737212.3 | 申请日： | 2013-12-30 |
| 公开（公告）号： | CN103773853A | 公开（公告）日： | 2014-05-07 |
| 发明（设计）人： | 杨雷亮;孙丽霞;邱德义;陈定虎;管维;王章根 | 申请（专利权）人： | 中华人民共和国中山出入境检验检疫局 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 南京理工大学专利中心 32203 | 代理人： | 朱显国 |
| 地址： | 528403*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 lamp 技术 番茄 细菌 性溃疡 检测 方法 | ||
1.一种基于LAMP技术快速鉴定番茄细菌性溃疡病菌的检测方法，其特征在于：所述检测方法包括LAMP 引物的设计与合成、模板DNA的提取、LAMP 扩增体系建立，LAMP 扩增方法，所述的LAMP 扩增方法反应温度为63℃左右、反应在90min 内完成扩增，引物包括外引物、内引物；
所述的外引物是Cmm-F3 和Cmm-B3 ；
所述的内引物是Cmm-FIP 和Cmm-BIP；
所述引物序列自5' 端到3' 端如下：
Cmm-F3 CGCTCATGGGTGGAACAT
Cmm-B3 CGGAAAGGGTCCGACAAG
Cmm-FIP ACGTTCCCACCCCACAAGGATTTTGACATTGATGCCGGCTGA
Cmm-BIP CTGGTGTGTCGAGGGCATGTTTTTAAACCAGACACACCCAGAAG。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述模板DNA提取指番茄组织DNA的提取。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述LAMP 扩增体系建立是采用水溶液配置，体系总体积25μL，其中包括：
模板DNA 2μL
2×U-LAMP MIX 17μL
Cmm-F3 5uM， 1μL
Cmm-B3 5uM， 1μL
Cmm-FIP 40uM， 1μL
Cmm-BIP 40uM， 1μL
Bst DNA 酶 8 U/μL， 1μL
荧光染料 1μL。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述LAMP扩增方法采用实时荧光PCR仪，将按照LAMP扩增体系配制好的试剂加入反应器中，63℃左右反应1小时，共分为40个循环，每个循环1分钟30秒，每个循环结束时收集荧光。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述LAMP扩增方法采用普通水浴锅或金属浴完成，将按照LAMP扩增体系配制好的试剂加入PE管中，放入63℃左右水浴锅中保温90min，然后取出放入另一80℃水浴锅中保温10 min后，取出。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中华人民共和国中山出入境检验检疫局，未经中华人民共和国中山出入境检验检疫局许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201310737212.3/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种含隔离钢管的钢管混凝土防屈曲支撑及制作工艺
- 下一篇：可调行程集成串联缸
