[发明专利]一种快速测定畜禽粪便中氟喹诺酮类药物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及畜禽粪便中氟喹诺酮类药物的测定，具体的说是一种新的畜禽粪便中氟喹诺酮类药物的提取方法。

背景技术

氟喹诺酮是一类全人工合成抗菌类药物，在化学上与萘啶酮酸相关，其作用机理是直接作用于细菌的核、抑制细菌的DNA旋转酶，使酶不能在DNA双链上引入切口，破坏细菌的代谢和繁殖，迅速杀灭细菌。最初这类药物用于治疗尿道感染，现在已发展到治疗系统感染疾病，并且在养殖业中作为预防和治疗药物普遍使用。氟喹诺酮类药物在动物体内吸收性差，75%以上会以原形药物形式排出体外（参考文献1：管荷兰，于海凤，王嘉宇.氟喹诺酮类抗生素在土壤中的归趋及其生态毒性研究进展.生态学杂志，2012,31(12):3228-3234）。近年来，氟喹诺酮类药物药物在养殖畜禽粪中被普遍发现，含量达到mg·kg^-1级别（参考文献2：马丽丽，郭昌胜，胡伟，沙健，朱兴旺，阮悦斐，王玉秋.固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法同时测定土壤中氟喹诺酮、四环素和磺胺类抗生素.分析化学研究报告，2010，38(1):21-26.；参考文献3：IA.Investigation of the tetracycline,sulfonamide,and fluoroquinolone antimicrobial compounds in animal manure and agricultural soils in Turkey.Science of the Total Environment，2009，407：4652–4664）。那么大量氟喹诺酮类药物将随畜禽粪便进入环境，将会对地表水、农田土壤，甚至地下水造成污染。因此，对粪便中残留的氟喹诺酮类药物的测定尤为重要。

现阶段国内外提取畜禽粪便中氟喹诺酮类药物的方法多借鉴测定农药残留的方法。使用以上方法有如下缺点：1）其它方法多采取有机试剂提取，对人体有害；2）部分方法提取后续步骤需要使用固相萃取柱分离，其价格较贵，也会造成操作复杂；3）部分方法多采用液相串联质谱，虽然具有更低的灵敏度，对样品的分离度要求不高，但是存在较强的基质效应，尤其是对复杂的粪便样品，并且仪器的使用及维护成本很高。

发明内容

本发明的目的是提供一种重复性好，灵敏度高，并且简单易行的测定畜禽粪便中氟喹诺酮类药物的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

1）采集的禽畜粪便样品首先需要冻干处理，冻干后的样品避光保存，分析前用研钵研磨，并过2mm筛后进行样品前处理；

2）准确称取0.50-1.00g样品置于10-20mL塑料离心管中，加入50%氯化钙盐酸缓冲液5-10mL，涡旋混合1分钟，超声提取15-30分钟，离心(4500r/min)10分钟，收集上清液；

3）残渣用上述方法反复提取2次，合并上清液；

4）溶液过0.22μm滤膜收集于棕色样品瓶中待测；

5）首先用高效液相色谱仪器对单一标准样品进行定性分析（浓度为10-100ng/mL），确定其保留时间。色谱条件：色谱柱为Kromasil C18（5um，250×4.6mm)，于激发波长280nm、发射波长450nm处进行检测，流动相为甲醇-水(78.5:21.5，V/V)，流速为1.0mL·min^-1，进样量为20μL。

6）标准曲线制备：制备混合标准品工作液系列浓度为10，50，100，500，1000ng/mL（每种标准品的浓度），在同上色谱条件下进行测定。以为峰面积为纵坐标，氟喹诺酮浓度（ng/mL）为横坐标建立各化合物标准曲线。

7）在同上色谱条件下，对待测样品中的目标物含量进行测定，根据保留时间确定目标物种类，根据标准曲线确定其含量。

重要试剂的配置：

50%氯化钙盐酸缓冲液：50g氯化钙溶于100mL去离子水，用1mol浓度的盐酸调节pH为3.0，即制备成提取液。

流动相：甲醇与水按照78.5:21.5体积比配置所需流动相。

本方法涉及的原理：