[发明专利]一种人体表皮组织的快速构建制备方法

说明书

技术领域   

本发明涉及一种人体表皮组织的快速构建制备方法，属生物组织材料构建及制备应用的技术领域。

背景技术    

皮肤覆盖于人体表面，是人体最大的器官，皮肤作为人体的第一道生理防线，时刻参与着机体的功能活动，通过分泌、排泄和吸收等功能维持体内代谢平衡，保护机体内组织器官免受外界环境伤害；人体皮肤组织由表皮、真皮和皮下组织构成，人体表皮在皮肤创伤后的修复中具有重要作用，如创面不能及时愈合常会造成水份、蛋白质的丢失，增加感染几率，且极易形成增生性瘢痕，如能及早移植表皮封闭创面，可有效减少或减轻增生性瘢痕的形成。

瘢痕病人是一个巨大的群体，尤其是皮肤烧伤居多，小面积皮肤烧伤病人多采用自体皮肤移植，对于大面积皮肤深度烧伤病人，自体供皮有限，体外构建类似人体的表皮结构治疗皮肤烧伤病人是有效的；体外表皮重建的方法也有多种形式，例如Genzyme公司的表皮膜，以及表皮替代物；但是由于人体表皮组织体外培养条件严格，时间较长，往往达不到临床治疗快速封闭创面的要求和时间，故寻求一种快速构建制备人体表皮组织的方法是十分必要的。

发明内容   

发明目的   

本发明的目的是针对背景技术的情况，采用壳聚糖和明胶形成薄膜，培养人体表皮角质形成细胞，在高压无菌下生成人体表皮角质形成细胞薄膜，以快速构建制成人体表皮组织，增强皮肤移植治疗的效果。

技术方案

本发明使用的化学物质材料为：人体皮肤组织、壳聚糖、明胶、人体表皮角质形成细胞培养液、高糖培养基、氯化钙、碘酒、磷酸盐溶液、硫酸庆大霉素、青霉素、蛋白酶、胶原酶、胎牛血清、胰蛋白酶、乙二胺四乙酸、醋酸、戊二醛、氢氧化钠、硼氢化钠、二氧化碳、灭菌去离子水、二甲基亚砜、生理盐水，其准备用量如下：以克、毫升、毫米、厘米³为计量单位；

人体皮肤组织：                                    50g±0.1g

壳聚糖：                                          5g±0.01g

明胶：                                            5g±0.01g

人体表皮角质形成细胞培养液：Ca²⁺浓度0.09 mmol/L    200mL±1mL

高糖培养基：Ca²⁺浓度1.8mmol/L                     200mL±1mL

氯化钙：                                          0.5 g±0.001g

碘酒：                                            10mL±0.1mL

磷酸盐溶液：                                      500mL±5mL

硫酸庆大霉素：40000单位/mL                       4mL±0.1mL

青霉素：800000单位/g                              5g±0.1g

蛋白酶：                                          0.5g±0. 001g

胶原酶：                                          0.5g±0. 001g

胎牛血清：                                        20mL±1mL

胰蛋白酶：                                        0.5g±0. 001g

乙二胺四乙酸：                                    0.05g±0. 001g

醋酸：                                            5mL±0.1mL

戊二醛：浓度50%                                  5mL±0.1mL

氢氧化钠：                                        5g±0.1g