[发明专利]一种草鱼呼肠孤病毒的间接ELISA检测试剂盒

权利要求书

1.杂交瘤细胞株S467，已于2013年12 月10 日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO: C2013193。

2.一种抗草鱼IgM的单克隆抗体，其由保藏编号为CCTCC NO: C2013193的杂交瘤细胞株或其传代细胞株分泌产生。

3.权利要求1所述的杂交瘤细胞株或权利要求2所述的单克隆抗体在制备抗草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型和/或草鱼出血病检测试剂或诊断试剂中的应用。

4.一种草鱼呼肠孤病毒间接ELISA检测试剂盒，所述试剂盒中包括抗草鱼IgM的单克隆抗体的酶标记物，包被有抗原的酶标板。

5.根据权利要求4所述的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述抗草鱼IgM的单克隆抗体为权利要求2所述的单克隆抗体。

6.根据权利要求4所述的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述抗原为草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型S10基因的编码蛋白，其序列如SEQ ID NO:2所示。

7.根据权利要求4所述的间接ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括标准血清、TMB显色液、终止液和洗涤液。

8.一种草鱼呼肠孤病毒间接ELISA检测方法，包括如下步骤：

（1）加样：将待检样品加入包被有草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型S10基因的编码蛋白（SEQ ID NO:2）的酶标包被板反应孔内；

（2）温育：用封板膜封板后置37℃温育；

（3）洗涤：揭掉封板膜，用PBST洗涤液洗涤酶标板；

（4）加入二抗：往反应孔中加入酶标二抗，所述酶标二抗为权利要求2所述抗草鱼IgM的单克隆抗体的辣根过氧化物酶标记物；

（5）温育：操作同（2）；

（6）洗涤：操作同（3）；

（7）显色：往反应孔中加入TMB显色剂，37℃避光显色；

（8）测定及结果判断。