[发明专利]参芪降糖制剂HPLC标准指纹图谱及其构建方法

权利要求书

1.一种参芪降糖制剂HPLC标准指纹图谱的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：

1）制备参芪降糖制剂供试品溶液：粉碎参芪降糖制剂，置于带塞的锥形瓶中，加入甲醇，使参芪降糖制剂的浓度为40~60mg/mL，密塞，称定重量，超声处理30~60min，功率400W，频率40KHz，静置放冷，再称定重量，用甲醇弥补减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液，置蒸发皿中蒸干，残渣加去离子水使其溶解，去离子水的体积为滤液的0.4~0.8倍，再用去离子水饱和的正丁醇萃取3~4次，每次使用的去离子水饱和的正丁醇体积为滤液的0.6~1.0倍，合并每次萃取后的正丁醇液，置于蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇溶解并定容，摇匀，滤过，取续滤液，即可；

2）对照品溶液的制备：称取人参皂苷Re、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rd、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊花糖苷、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素，加甲醇溶解，分别制成相对应的对照品溶液； 

3）参芪降糖制剂的HPLC指纹图谱的建立：分别吸取对照品溶液和供试品溶液，进样，用高效液相色谱仪测定，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为乙腈，流动相B为体积百分数为0.1%的磷酸水溶液，线性梯度洗脱，洗脱程序为：

检测波长为203nm，柱温为25~35℃，流速为0.8~1.2mL/min，以对照品的色谱峰相对保留时间和峰面积为1，计算供试品的相对保留时间和相对峰面积，即得到参芪降糖制剂HPLC指纹图谱；

4）参芪降糖制剂HPLC 的标准指纹图谱：高效液相色谱仪测定至少10 批参芪降糖制剂样品供试品溶液的指纹图谱，并进行分析比较，得到由共有特征峰构成的指纹图谱为参芪降糖制剂HPLC 的标准指纹图谱。

2.根据权利要求1所述的一种参芪降糖制剂HPLC标准指纹图谱的构建方法，其特征在于：步骤1）所述的参芪降糖制剂的剂型选自片剂、颗粒剂和胶囊剂。

3.根据权利要求1所述的一种参芪降糖制剂HPLC标准指纹图谱的构建方法，其特征在于：步骤1）所述的参芪降糖制剂由人参茎叶皂苷、黄芪、五味子、山药、地黄、麦冬、茯苓、天花粉、泽泻、枸杞子、覆盆子11味药材制成。

4.根据权利要求1所述构建方法构建的参芪降糖制剂HPLC标准指纹图谱，其特征在于：该指纹图谱中有38 个共有特征峰，从左到右编号为1至38，以编号28特征峰为参照峰分别计算其他共有特征峰相对保留时间，编号为1至38的特征峰相对保留时间依次分别为：0.105~0.111 min、0.115~0.121 min、0.127~0.135 min、0.154~0.162 min、0.165~0.171 min、0.246~0.251 min、0.336~0.339 min、0.368~0.370 min、0.438~0.441 min、0.542~0.544 min、0.546~0.547 min、0.590~0.592 min、0.596~0.598 min、0.616~0.622 min、0.694~0.698 min、0.708~0.710 min、0.770~0.772 min、0.813~0.819 min、0.890~0.892 min、0.904~0.906min、0.915~0.917 min、0.929~0.931 min、0.936~0.938 min、0.938~0.942 min、0.954~0.956 min、0.962~0.966 min、0.967~ 0.969 min、1.000 min、1.105~1.017 min、1.048~1.409 min、1.098~1.099 min、1.180~1.182 min、1.269~1.271 min、1.324~1.326 min、1.367~1.369 min、1.403~1.406 min、1.440~1.442 min、1.473~1.475 min。

5.根据权利要求4所述的参芪降糖制剂HPLC标准指纹图谱，其特征在于：所述的编号分别为1至38的38 个共有特征峰中：

归属于人参茎叶皂苷的特征峰编号为15、16、18、19、20、21、23、25、26、27、28、30、32一共13个，其中15号峰为人参皂苷Rg₁、16号峰为人参皂苷Re、28号峰为人参皂苷Rd；

归属于黄芪的特征峰编号为10、17、22、24一共4个，其中10号峰为毛蕊异黄酮葡萄糖苷、24号峰为黄芪甲苷；

归属于五味子的共有峰编号为5、29、31、33、34、35、36一共7个，其中29号峰为五味子醇甲、35号峰为五味子甲素、36号峰为五味子乙素；

归属于地黄的特征峰编号为11、12、14一共3个，其中12号峰为毛蕊花糖苷；

归属于覆盆子的特征峰编号为7、13、37、38一共4个。