[发明专利]参芪降糖制剂HPLC标准指纹图谱及其构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种参芪降糖制剂的检测方法，特别涉及一种参芪降糖制剂HPLC标准指纹图谱的构建方法，以及由此法得到的参芪降糖制剂HPLC标准指纹图谱。

背景技术

中药指纹图谱系指中药原料药材、饮片、半成品、成品等经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其特征的共有峰的图谱。中药指纹图谱能客观地揭示和反映中药内在质量的整体性和特征性，用以评价中药的真实性、有效性、稳定性和一致性。中药的临床疗效并非由单一活性成分的作用或多种活性成分作用的简单相加，复方制剂更是如此。用已知某一个或几个活性成分或有效成分为质量指标，通过定性和定量分析来判断药品质量的优劣，显然是不全面的。中药质量的评价需要综合的、宏观的、非线性的质量评价体系，中药指纹图谱就是能较好地适应这一特点的一种质量评价与控制模式。在国际上，如日本、德国、美国、加拿大、印度等许多国家，对一些传统药、天然药和草药，都把指纹图谱作为质量控制标准的内容之一。欧共体对草药质量的指南中也称，单靠测定某有效成分考察质量的稳定性是不够的，因为草药及其制剂是以整体为活性物质。世界卫生组织(WHO)在1996年草药评价指导原则中规定：如果草药的活性成分不明，可以提供特征色谱图谱，以证明产品质量的一致。因此指纹图谱是中药现代化和国际化的关键技术之一。

参芪降糖制剂是纯中药制剂，由人参茎叶皂苷、黄芪、五味子、山药、地黄、麦冬、茯苓、天花粉、泽泻、枸杞子、覆盆子十一味药材组成，具有益气养阴、滋脾补肾的功效，主治消渴症，用于II型糖尿病。该药有调节受体水平作用，对应激性高血糖、胰岛损伤性高血糖、糖代谢异常后的脂质过氧化物以及细胞受体有调节代谢作用。且能对人胚肺二倍体细胞的生长与代谢产生影响，特别是对晚代细胞的增殖和细胞内糖元含量有正向促进作用。

中华人民共和国卫生部部标准(WS₃-180(Z-35)-95(Z))所载参芪降糖片质量标准采用薄层色谱法分别以人参皂苷Re、Rg₁、Rb₁对照品和五味子对照药材在各特定色谱条件下的薄层斑点为对照鉴别，并采用薄层扫描测定人参皂苷Re的含量，其不足之处在于：①所采用的检测方法步骤繁琐，而且参芪降糖制剂含有十一味药材的有效成分，这并不能全面的反映该制剂的化学成分的种类和含量，也不能全面地对该制剂的质量进行监控，没有对其中主要多味药材中的化学成分进行全面、系统的检测。②不能全面监控中间体，成品的质量。

发明内容

为了解决上述问题，本发明建立了一种合理、准确评价参芪降糖片药品整体性质量的标准指纹图谱，以及该指纹图谱的构建方法。

本发明的目的在于提供一种参芪降糖制剂HPLC标准指纹图谱的构建方法。

本发明的另一目的在于提供参芪降糖制剂HPLC标准指纹图谱。

本发明所采取的技术方案是：

一种参芪降糖制剂HPLC标准指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：

1)制备参芪降糖制剂供试品溶液：粉碎参芪降糖制剂，置于带塞的锥形瓶中，加入甲醇，使参芪降糖制剂的浓度为40～60mg/mL，密塞，称定重量，超声处理30～60min，功率400W，频率40KHz，静置放冷，再称定重量，用甲醇弥补减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液，置蒸发皿中蒸干，残渣加去离子水使其溶解，去离子水的体积为滤液的0.4～0.8倍，再用去离子水饱和的正丁醇萃取3～4次，每次使用的去离子水饱和的正丁醇体积为滤液的0.6～1.0倍，合并每次萃取后的正丁醇液，置于蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇溶解并定容，摇匀，滤过，取续滤液，即可；

2)对照品溶液的制备：称取人参皂苷Re、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rd、黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊花糖苷、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素，加甲醇溶解，分别制成相对应的对照品溶液；

3)参芪降糖制剂的HPLC指纹图谱的建立：分别吸取对照品溶液和供试品溶液，进样，用高效液相色谱仪测定，色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相A为乙腈，流动相B为体积百分数为0.1％的磷酸水溶液，线性梯度洗脱，洗脱程序为：

检测波长为203nm，柱温为25～35℃，流速为0.8～1.2mL/min，以对照品的色谱峰相对保留时间和峰面积为1，计算供试品的相对保留时间和相对峰面积，即得到参芪降糖制剂HPLC指纹图谱；