[发明专利]检测食品中乳酸菌的方法及检测用引物

权利要求书

1.检测食品中乳酸菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)提取食品中细菌基因组DNA；

(2)对步骤(1)提取的DNA进行PCR扩增，其中所使用的引物对是兼并引物对；其中所述引物对是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.2和SEQ IDNO.7、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.3和SEQ IDNO.7、SEQ IDNO.3和SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.7、SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.4和SEQ IDNO.7、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.9、以及SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.10；

(3)将步骤(2)的PCR扩增的产物进行电泳检测；如检测到唯一PCR扩增条带，则检测结果为阳性，否则检测结果为阴性；如检测结果为阳性则不需要进行步骤(4)，如检测结果为阴性则需要进行步骤(4)；

(4)任选对步骤(2)的PCR扩增的产物进行测序。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述食品是酸奶。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述乳酸菌是嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、嗜热乳链球菌、保加利亚乳杆菌、双歧乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳酸菌、两歧双歧杆菌、乳双歧杆菌和长双歧杆菌中的一种或多种。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述PCR扩增的体系采用Takara DRR006A Ex Taq Hot Start Version试剂盒，如下：

5U／μl的TaKaRaExTaqHS0.25μl

加Mg²⁺的10×Ex Taq Buffer5μl

各2.5mM的dNTPMixture4μl

各20μM的正向和反向引物各0.5μl

细菌基因组提取液中的DNA50ng

加水定容至50μl；

所述PCR扩增条件为：95℃2min预变性；95℃30s，55℃30s，72℃40s，45个循环；72℃延伸5min。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，如果PCR扩增的产物经电泳检测是大小为250-300bp的唯一一条PCR扩增条带，则检测结果为阳性，不进行步骤(4)；如果出现该条带的同时也出现了其他条带，则检测结果为阴性，进行步骤(4)。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中，所述测序是illimina genome analyzer测序。