[发明专利]利用乳清蛋白肽降低血清胆固醇水平的产品和制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及利用乳清蛋白肽降低血清胆固醇水平的产品和制备方法，属于生物技术领域，涉及的是具有降低血清胆固醇功能的乳清蛋白肽的制备方法以及分离纯化技术。

背景技术

近年来，随着人类社会的进步和科技的发展，人们的生活水平和膳食营养水平都得到的大幅度提高，但随之而来的人们的健康隐患也在无形中提升，其中就包括心脑血管疾病。高血压、冠心病、脑血栓就是心脑血管疾病的常见症状，他们主要是由高血脂症引发的动脉硬化引起的。由于高胆固醇对人类健康危害极大，医药业人工合成的降胆固醇药物又不可避免的会给人体带来副作用，因此，寻找天然的、安全可靠的降胆固醇肽意义重大。

目前很多研究学者把目标指向了天然的降胆固醇活性因子，研究发现，许多食物蛋白源生物活性肽都具有降低血液胆固醇水平的功能，继而掀起了研究开发降胆固醇活性肽的热潮。

实际上，一直以来研究食物源蛋白生物活性肽对动物或人类血清胆固醇水平的影响更多的是采用大豆蛋白和酪蛋白。而对于牛乳清蛋白源生物活性肽对血液胆固醇水平的影响则相对研究较少。尽管如此，乳清蛋白源活性肽仍具有潜在的巨大研究价值。Nagaoka通过小鼠生物实验研究表明，相比大豆蛋白质或酪蛋白，牛乳清蛋白源生物活性肽具有更强的降血清胆固醇的功能。

然而，在体内很多活性肽不能够抵抗胃肠道的消化作用，也就不能到达靶部位发挥生理学作用。因此，要开发出能抵抗胃肠道的消化作用的降胆固醇肽至关重要。但是，在既往各种研究中未发现同时具有胆固醇胶束溶解度抑制活性和胃肠道稳定性的乳清蛋白活性肽，本发明所述的胆固醇胶束溶解度抑制活性较高的降胆固醇肽，同时具有较强的人体胃肠道稳定性，有利于其在体内吸收和转运，继而发挥降低血清胆固醇的作用。

发明内容

为了弥补利用乳清蛋白分离纯化具有降胆固醇功能的活性肽的技术参数不成熟和活性、稳定性较低的缺陷，本发明的目的是提供利用乳清蛋白肽降低血清降胆固醇水平的产品和制备方法。

为了实现上一目的，本发明的发明思路为：

本发明旨在以乳清浓缩蛋白为原料，对具有降低血清胆固醇水平的活性肽进行深入、系统的研究，建立生物酶技术生产乳源降胆固醇肽的工艺过程和工艺参数，研究膜分离浓缩与树脂吸附，结合多级色谱分离纯化技术，制出一些小分子量并具有降胆固醇功能的乳清蛋白水解肽，并采用模拟人体胃肠道试验研究表明其稳定性较强，为工业化生产提供理论基础和技术支撑。

本发明利用的生物酶是具有专一切割性的碱性蛋白酶，获得所需肽段优势更强。采用多级色谱进行分离纯化，所得组分纯度以及胆固醇胶束溶解度抑制率更高，在凝胶过滤时采用去离子水作为洗脱液，与以往的盐类洗脱液相比更加温和，能很好的达到分离效果，并且不会带来盐离子，避免带来健康隐患。本发明所得产品安全性极高，无毒副作用，与降胆固醇功能有关，对体内胆固醇溶解度具有抑制作用，可以作为制备降胆固醇药物、保健食品或功能性食品的用途。

本发明所述的是利用乳清蛋白肽降低血清降胆固醇水平的产品和方法，其步骤如下：

（1）用适宜蛋白酶水解乳清蛋白粉；

（2）利用超滤技术初分离乳清蛋白水解肽，冷冻干燥，得到粗多肽；

（3）将水解肽经大孔吸附树脂脱盐处理；

（4）用凝胶过滤色谱（SepHadex G-50）对水解的肽进行分离纯化；

（5）使用反相高效液相色谱（RP-HPLC）对步骤（4）中得到的胆固醇胶束溶解度抑制率较高的洗脱组分进行进一步分离纯化。

（6）对（5）中得到的产品进行体外稳定性试验。体外模拟人体胃肠道环境两个阶段的消化过程，并分别测定消化前后其胆固醇胶束溶解度抑制活性的变化，来确定其稳定性。

所述步骤（1）中，原料为浓缩乳清蛋白WPC80，其蛋白质含量（以干重计）不低于 80.0 %，水分低于 5.5 %，乳脂低于9.0 %，乳糖不低于10.0 %。以胆固醇胶束溶解度抑制率为指标，对最佳水解用工具酶进行筛选，最终选定碱性蛋白酶为工具酶。以胆固醇胶束溶解度抑制率为指标，采用单因素和响应面实验设计对水解条件进行筛选。具体如下，按照底物质量浓度5%将其水化，90℃水浴加热10 min，使乳清蛋白变性，冷却至55 ℃，调pH至9.0，加酶量为每1g乳清蛋白加碱性蛋白酶6000-7000U，水解时间为8 h。水解结束后温度升至90 ℃水浴10 min，使酶失活，然后4000×g下离心15 min，取上清液，冷冻干燥，得到水解肽粉。