[发明专利]一种丙型肝炎病毒基因型检测试剂盒

权利要求书

1.一种丙型肝炎病毒基因型检测试剂盒，其包括3种丙型肝炎病毒PCR反应液，其中，

HCV1/3型PCR反应液含有两种用于靶多核苷酸检测的探针和用于靶多核苷酸扩增的上下游引物，且所述引物和探针的序列为，

上游引物HCV1-F：5'-AGGAAGACTTCCGAGCGGTC-3'；

下游引物HCV1-R：5'-TGCCATAGAGGGGCCAAGG-3'；

探针HCV1-P：5’FAM-TACCCGGGCTGCGCCCAGG-BHQ13’；

上游引物HCV3-F：5'-GTCCTTTCTTGGAACAACCCGC-3'；

下游引物HCV3-R：5'-GACCCAACACTACTCGGCTAGTGA-3'；

探针HCV3-P：5’FAM-CAATACCCAGAAATTTGGGCGTGCC-BHQ13’；

HCV2/6型PCR反应液含有两种用于靶多核苷酸检测的探针和用于靶多核苷酸扩增的上下游引物，且所述引物和探针的序列为，

上游引物HCV2-F：5'-CGGAATTGCCGGGAAGACT-3'；

下游引物HCV2-R：5'-GCCTTTCGCAACCCAACG-3'；

探针HCV2-P：5’FAM-ATAAACCCACTCTATGCCCGGTCATTTGG-BHQ13’；

上游引物HCV6-F：5'-CATGGGGTACATTCCCGTCG-3'；

下游引物HCV6-R：5'-TTGATCCCGTCCTCGATTGC-3'；

探针HCV6-P：5’FAM-ACACCATGTGCGAGCGCAGCCG-BHQ13’。

HCV1b/内标型PCR反应液含有用于靶多核苷酸扩增的上游引物HCV1b-F、下游引物HCV1b-R及用于靶多核苷酸检测的探针HCV1b-P，并含有用于检测内标的上游引物IC-F、下游引物IC-R及用于检测内标的探针IC-P，且所述引物和探针的序列为，

上游引物HCV1b-F：5'-ACCTCGTGGAAGGCGACAA-3'；

下游引物HCV1b-R：5'-CCATAGAGGGGCCAAGGGTA-3'；

探针HCV1b-P：5’FAM-CCAAGGCTCGCCAGCCCGAG-BHQ13’；

上游引物IC-F：5’-CACCACTTAAATCCTAAGGTTCCAG-3’；

下游引物IC-R：5’-CTGATGACATAATTGAGATTGCACC-3’；

探针IC-P：5’HEX-TTTTGCTGACTCACGTATTCGTAGCCAA-BHQ13’。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述3种丙型肝炎病毒PCR反应液中均含有PCR反应缓冲液、脱氧核糖核苷三磷酸。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括丙型肝炎病毒分型酶混合液、丙型肝炎病毒分型阴性对照和丙型肝炎病毒分型阳性对照，其中，所述丙型肝炎病毒分型酶混合液包括Tth酶、H-Taq DNA聚合酶。

4.根据权利要求1到3中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括丙型肝炎病毒分型内标，其为插入pUC18T载体的一段长为100碱基对的人工合成DNA序列的重组体，所述100碱基对的序列为：

5’-CACCACTTAAATCCTAAGGTTCCAGCTCTGTCATCCAGTTTTGCTGACTCACGTATTCGTAGCCAATCTTCTGGAGGTGCAATCTCAATTATGTCATCAG-3’。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述丙型肝炎病毒分型内标的浓度为1.00E+03IUs/ml～1.00E+06IUs/ml。

6.根据权利要求1到5中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括RNA提取溶液和RNA洗脱液，其中，

所述RNA提取溶液包括，

RNA提取溶液Ⅰ：包含十二烷基硫酸钠、曲拉通、异硫氰酸胍和100～400μg/ml的磁珠；

RNA提取溶液Ⅱ：含4-羟乙基哌嗪乙磺酸、氯化钠，且pH6.5±0.2；

RNA提取溶液Ⅲ：含曲拉通和氯化钠；

RNA提取溶液Ⅳ：含矿物油。