[发明专利]犬瘟热病毒、犬腺病毒Ⅱ型和犬副流感病毒的多重PCR检测引物组

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种犬瘟热病毒、犬腺病毒Ⅱ型和犬副流感病毒的多重PCR检测引物组。 

背景技术

犬瘟热病毒在分类上属副黏病毒科，是一种单链RNA病毒。在室温下，该病毒相对不稳定，尤其对紫外线、干燥及50～60℃以上的高温敏感，在冷冻条件下，该病毒可存活数周。 

犬腺病毒Ⅱ型可引起犬的传染性喉气管炎及肺炎症状。临床特征表现持续性高热、咳嗽、浆液性至粘液性鼻漏、扁桃体炎、喉气管炎和肺炎。从临床发病情况统计，该病多见于4月龄以下的幼犬，在幼犬可以造成全窝或全群咳嗽，因此该病依临床特征常称为“犬窝咳”。 

犬副流感是犬副流感病毒感染犬的主要的呼吸道传染病。 临床表现发热、咳嗽、流涕等症状，病理变化以卡他性鼻炎和支气管炎为特征。研究表明，犬副流感病毒也可引起急性脑髓炎和脑内积水，临床表现后躯麻癖和运动失调等症状，该病在全国各地均有发生。 

目前，检测上述三种犬病毒主要使用两种方法，一种是胶体金试纸条；另一种是荧光探针技术。而胶体金试纸条方法是一个试纸条只能检测单一一种犬病，不能同时检测三种病，而且成本很高，检测一种病通常需要50-100元。荧光探针技术方法中诊断试剂成本较高，检测时需要价格昂贵的基因芯片点样仪和基因芯片扫描仪，不适合基层单位的推广和应用，而且检测时限长，检测样品需要至少5-7个小时。 

如何对检测技术进行改进，既能够同时检测上述三种病毒，而且又能够降低成本，节约时间，成为人们亟待解决的问题。 

发明内容                                       

本发明的一个目的在于提供一种犬瘟热病毒、犬腺病毒Ⅱ型和犬副流感病毒的多重PCR检测引物组。

所述引物组包括引物对A、引物对B和引物对C； 

    所述引物对A包括引物1和引物2；

    所述引物对B包括引物3和引物4；

    所述引物对C包括引物5和引物6；

    所述引物1、引物2、引物3、引物4、引物5和引物6的核苷酸序列分别为序列表中的序列1、序列2、序列3、序列4、序列5和序列6。

优选，所述引物组由引物对A、引物对B和引物对C组成； 

    所述引物对A由引物1和引物2组成；

    所述引物对B由引物3和引物4组成；

所述引物对C由引物5和引物6组成。

所述引物对A、引物对B和引物对C的摩尔比为1:1:1。 

本发明的第二个目的在于提供一种犬瘟热病毒、犬腺病毒Ⅱ型和犬副流感病毒的多重PCR检测试剂，由所述的引物组、PCR缓冲液、dNTP、DNA聚合酶和水组成； 

    所述引物组中引物对A中各引物在所述PCR检测试剂中的终浓度各为0.002~0.008μM，所述引物组中引物对B中各引物在所述PCR检测试剂中的终浓度各为0.002~0.008μM，所述引物组中引物对C中各引物在所述PCR检测试剂中的终浓度各为0.002~0.008μM；

所述dNTP在所述PCR检测试剂中的终浓度为8~16μM；

所述DNA聚合酶在所述PCR检测试剂中的终浓度为0.05~0.2U/μL。

优选，所述引物组中引物对A中各引物在所述PCR检测试剂中的终浓度各为0.004μM，所述引物组中引物对B中各引物在所述PCR检测试剂中的终浓度各为0.004μM，所述引物组中引物对C中各引物在所述PCR检测试剂中的终浓度各为0.004μM；或所述引物组中引物对A中各引物在所述PCR检测试剂中的终浓度各为0.008μM，所述引物组中引物对B中各引物在所述PCR检测试剂中的终浓度各为0.008μM，所述引物组中引物对C中各引物在所述PCR检测试剂中的终浓度各为0.008μM； 

所述dNTP在所述PCR检测试剂中的终浓度为10μM；

所述DNA聚合酶在所述PCR检测试剂中的终浓度为0.1U/μL。

本发明的第三个目的在于提供一种犬瘟热病毒、犬腺病毒Ⅱ型和犬副流感病毒的多重PCR检测试剂盒，所述试剂盒为含有所述的PCR引物组或所述的PCR检测试剂的试剂盒。 

上述引物组或上述PCR检测试剂或上述PCR检测试剂盒在制备检测和/或辅助检测待测样品中是否含有犬瘟热病毒、犬腺病毒Ⅱ型和犬副流感病毒产品中的应用也是本发明的保护范围。