[发明专利]一种检测端粒酶活性的探针、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种检测端粒酶活性的探针，其特征在于，所述检测探针包括端粒酶结合引物和反向引物，所述端粒酶结合引物依次包括A、B以及C，所述A、B、C均为核苷酸序列，所述A的核苷酸序列为在C的核苷酸序列中加入切刻内切酶的识别位点，所述B具有DNA酶序列，所述DNA酶序列为具有氯高铁血红素结合位点的多G核苷酸序列，所述DNA酶序列的两端具有切刻内切酶的识别位点，

所述核苷酸序列A中，距离A的5’端的15～24个碱基处为切刻内切酶的识别位点；

所述核苷酸序列C具有被端粒酶识别的序列；

所述反向引物具有与（TTAGGG）n互补的序列，其中，n为5～10的自然数，所述反向引物与所述端粒酶结合引物不互补。

2.如权利要求1所述的检测端粒酶活性的探针，其特征在于，所述DNA酶序列为如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:5任一所示的核苷酸序列。

3.如权利要求1所述的检测端粒酶活性的探针，其特征在于，所述DNA酶序列两端的切刻内切酶为Nt.BspQI、Nb.BsmI、Nt.AlwI或Nt.BstNBI切刻酶。

4.如权利要求1所述的检测端粒酶活性的探针，其特征在于，所述A或C的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。

5.一种检测端粒酶活性的试剂盒，其特征在于，包括：

端粒酶检测试剂，及

DNA酶检测试剂，

其中，所述端粒酶检测试剂包括端粒酶结合引物、反向引物、DNA聚合酶、切刻内切酶及端粒酶检测缓冲液，所述DNA酶检测试剂包括氯高铁血红素以及DNA过氧化物酶检测试剂；

所述检测探针包括端粒酶结合引物和反向引物，所述端粒酶结合引物依次包括A、B以及C，所述A、B、C均为核苷酸序列，所述A的核苷酸序列为在C的核苷酸序列中加入切刻内切酶的识别位点，所述B具有DNA酶序列，所述DNA酶序列为具有氯高铁血红素结合位点的多G核苷酸序列，所述DNA酶序列的两端具有切刻内切酶的识别位点，

所述核苷酸序列A中，距离A的5’端的15～24个碱基处具有切刻内切酶的识别位点；

所述核苷酸序列C具有被端粒酶识别的序列；

所述反向引物具有与（TTAGGG）n互补的序列，其中，n为6～10的自然数，所述反向引物与所述端粒酶结合引物不互补。

6.如权利要求5所述的检测端粒酶活性的试剂盒，其特征在于,所述DNA酶序列为如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:5任一所示的核苷酸序列。

7.如权利要求5所述的检测端粒酶活性的试剂盒，其特征在于，所述DNA聚合酶为Bst2.0热启动DNA聚合酶、Phi29DNA聚合酶、或Vent exo^–DNA聚合酶；所述DNA酶序列两端的切刻内切酶为Nt.BspQI、Nb.BsmI、Nt.AlwI或Nt.BstNBI切刻内切酶。

8.如权利要求5所述的检测端粒酶活性的试剂盒，其特征在于，所述A或C的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。

9.如权利要求5所述的检测端粒酶活性的试剂盒，其特征在于，所述DNA过氧化物酶检测试剂包括3-氨基邻苯二甲酰肼、N,N二甲基二吖啶硝酸盐、2,4,5-三苯基咪唑、3，4，5-三羟基苯甲酸或双(2,4,6-三氯苯基)草酸盐（过氧草酸盐）。