[发明专利]一种制备猪源干扰素-λ3的方法和应用

权利要求书

1.一种在大肠杆菌中表达猪源IFN-λ3基因的方法，其特征在于具体步骤如下：

（1）用poly（I:C）诱导培养ST细胞，收获诱导培养的细胞，用Trizol试剂提取细胞总RNA；

（2）设计扩增猪源IFN-λ3基因全长的特异性上游引物S1和下游引物S2，以及扩增不含信号肽序列的猪源IFN-λ3的特异性上游引物P1和下游引物P2，引物如下：

上游引物S1：5’-ATGGCCCTGGGTGGCTCG-3’；

下游引物S2：5’-TCAGACACACAGGTCTCC-3’；

上游引物P1：5’-CGGGTACCGTGCCTGTCCCTGAAGCCC-3’；

下游引物P2：5’-CCGCTCGAGGACACACAGGTCTCCACT-3’；

（3）利用引物S1和S2通过RT-PCR技术扩增猪源IFN-λ3基因全长，；

（4）将猪源IFN-λ3基因克隆入pMD-18T载体、进行测序鉴定，获得重组载体pMD-18T-IFN-λ3；

（5）以pMD-18T-IFN-λ3克隆载体为模板，利用引物P1和P2扩增不含信号肽序列的猪源IFN-λ3的基因，并利用KpnI和XhoI这两个多克隆位点，将猪源IFN-λ3基因定向亚克隆至原核表达载体pET-32a，获得重组表达质粒pET-32a-Po-IFN-λ3；

（6）重组表达质粒pET-32a-Po-IFN-λ3转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS；

（7）确定原核表达系统中表达猪源IFN-λ3的最佳诱导温度、时间和IPTG浓度；

（8）猪源IFN-λ3在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中的诱导表达。

2.根据权利要求1所述的在大肠杆菌中表达猪源IFN-λ3基因的方法，其特征在于步骤（7）中所述的最佳诱导温度、时间和IPTG浓度为诱导温度为20℃，时间为16h，IPTG浓度为0.4mM。

3.权利要求1或2所述方法获得的猪源IFN-λ3蛋白在制备抗猪流行性腹泻病毒药物中的应用。