[发明专利]固定化土曲霉脂肪酶的制备方法及其应用

权利要求书

1.固定化土曲霉脂肪酶的制备方法，包括以下步骤：将土曲霉脂肪酶与海藻酸钠接枝聚乙二醇单甲醚混合均匀后，再与α-环糊精反应，得到固定化土曲霉脂肪酶。

2.根据权利要求1所述的固定化土曲霉脂肪酶的制备方法，其特征在于：包括以下操作步骤：

a、制备海藻酸钠接枝聚乙二醇单甲醚；

b、将土曲霉脂肪酶加入到海藻酸钠接枝聚乙二醇单甲醚的三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲溶液中混合均匀，再滴加α-环糊精的三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲溶液，滴加完毕后，3～5℃下反应12～24h，将反应液离心，然后将沉淀冷冻干燥，得到固定化土曲霉脂肪酶。

3.根据权利要求2所述的固定化土曲霉脂肪酶的制备方法，其特征在于：步骤b所述海藻酸钠接枝聚乙二醇单甲醚、α-环糊精、土曲霉脂肪酶的质量比为1～2︰6～9︰0.015～0.075。

4.根据权利要求2所述的固定化土曲霉脂肪酶的制备方法，其特征在于：步骤b所述三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲溶液的pH值为6.6～8.0；步骤b所述海藻酸钠接枝聚乙二醇单甲醚的三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲溶液的浓度为1.0～2.0%(w/v)；步骤b所述α-环糊精的三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲溶液的浓度为6.0～9.0%。

5.根据权利要求1～4任一项所述的固定化土曲霉脂肪酶的制备方法，其特征在于：将固定化土曲霉脂肪酶进行双重固定化；所述双重固定化的操作步骤包括：将固定化土曲霉脂肪酶用三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲溶液分散沉淀，再加入海藻酸钠制成质量-体积分数为1%～1.5%的混合液，再将上述混合液滴入质量-体积分数为0.5%～1.0%的氯化钙溶液中，形成直径为2～4mm的小球，制得双重固定化土曲霉脂肪酶。

6.权利要求1～4任一项所述的方法制备得到的固定化土曲霉脂肪酶或权利要求5所述的方法制备得到的双重固定化土曲霉脂肪酶，在选择性催化消旋的酮洛芬乙烯酯水解反应中的用途。

7.根据权利要求6所述的固定化土曲霉脂肪酶选择性催化消旋的酮洛芬乙烯酯水解反应的用途，其特征在于：水解反应的操作步骤包括：将固定化土曲霉脂肪酶或双重固定化土曲霉脂肪酶与酮洛芬乙烯酯在有机溶剂/三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲溶液中反应。

8.根据权利要求7所述的固定化土曲霉脂肪酶选择性催化消旋的酮洛芬乙烯酯水解反应的用途，其特征在于：所述水解反应的反应温度为30～50℃，反应时间为96～120h。

9.根据权利要求7所述的固定化土曲霉脂肪酶选择性催化消旋的酮洛芬乙烯酯水解反应的用途，其特征在于：固定化土曲霉脂肪酶或双重固定化土曲霉脂肪酶与酮洛芬乙烯酯的质量比为1～10:1。

10.根据权利要求7所述的固定化土曲霉脂肪酶选择性催化消旋的酮洛芬乙烯酯水解反应的用途，其特征在于：所述的有机溶剂为1,4-二氧六环、乙腈、丙酮、异丙醇、四氢呋喃、正丁醇、二氯甲烷、叔丁基甲醚、异丙醚、环己烷或正己烷中的任意一种；所述三羟甲基氨基甲烷-HCl缓冲溶液的pH为7～8，含水量为20%～40%。