[发明专利]发酵方法

说明书

背景

细菌百日咳博德特氏菌(Bordetella pertussis)是百日咳(在婴儿和年幼儿童中可严重的呼吸系统疾病)的致病因子。该疾病病程的特征在于快速咳嗽的发作，和随后的吸气努力，经常与特征性的“喘息”声音相关。在严重的情况下，缺氧可导致脑损伤；然而，最常见的并发症是继发性肺炎。

百日咳通常认为由百日咳博德特氏菌引起，但偶尔副百日咳博德特氏菌(B. parapertussis)从具有百日咳的典型体征和症状的患者分离到。副百日咳博德特氏菌感染比百日咳博德特氏菌的频率更低，其中5-10％的百日咳与副百日咳博德特氏菌相关(Mertsola (1985) Eur J Clin Microbiol 4; 123; Lautrop (1971) Lancet 1(7711) 1195-1198)。副百日咳博德特氏菌与轻度的临床症状相关，其组合它与百日咳博德特氏菌的血清学交叉反应性，使得副百日咳博德特氏菌难以诊断。

针对百日咳博德特氏菌的第一代疫苗是全细胞疫苗，由杀灭的全细菌构成。这些在20世纪50年代和60年代在许多国家被引入，并且成功降低百日咳的发病率。用全细胞百日咳博德特氏菌疫苗的问题在于与它们相关的高水平的反应原性。含有纯化的百日咳博德特氏菌蛋白的无细胞疫苗反应原性较低，并且已经被用于许多国家的接种疫苗计划。通常含有百日咳毒素(PT)、丝状血细胞凝集素(FHA)和相当经常的百日咳杆菌粘附素(PRN)的无细胞疫苗被广泛使用并提供有效保护免于百日咳的严重性。

概述

介绍

在第一个方面，提供了发酵方法，其包括以下步骤：

a) 提供博德特氏菌属物种细菌的样品；

b) 在第一环境中在至少一种bvg(博德特氏菌毒力基因)调节条件下将所述博德特氏菌属物种细菌的样品孵育至少5代，从而产生成熟培养物；

c) 在第二环境中在至少一种bvg调节条件不存在的情况下孵育所述成熟培养物；

其中步骤c)在步骤b)之后发生。

在第二个方面，提供了发酵方法，其包括以下步骤：

a) 在包含至少一种bvg调节剂的第一培养基中提供博德特氏菌属物种细菌的样品；

b) 在包含至少一种bvg调节剂的第一培养基中将所述样品孵育至少5代，从而产生成熟培养物；

c) 在第二培养基中在至少一种bvg调节剂不存在的情况下孵育所述成熟培养物；

其中步骤c)在步骤b)之后发生。

在第三个方面，提供了发酵方法，其包括以下步骤：

a) 在第一培养基中提供博德特氏菌属物种细菌的样品；

b) 在包含至少一种bvg调节剂的第一培养基中将所述样品孵育至少5代，从而产生成熟培养物；

c) 在第二培养基中在至少一种bvg调节剂不存在的情况下孵育所述成熟培养物；

其中步骤c)在步骤b)之后发生。

在第四个方面，提供了通过所述方法可获得的毒力因子。

在第五个方面，提供了通过所述方法获得的毒力因子。

在第六个方面，提供了包含毒力因子和药学上可接受的赋形剂的免疫原性组合物。

在第七个方面，提供了包含免疫原性组合物的疫苗。

在第八个方面，提供了免疫原性组合物或疫苗在预防或治疗疾病中的用途。

在第九个方面，提供了免疫原性组合物或疫苗在制备用于治疗或预防细菌性疾病的药物中的用途。

在第十个方面，提供了预防或治疗疾病的方法，其包括向患者施用免疫原性组合物或疫苗。

附图简述

图1. 描绘bvg^-基因型和bvg⁺基因型百日咳博德特氏菌细胞针对发酵时间的生长的图。bvg^-细胞的生长通过连接菱形点的线描绘；bvg⁺细胞的生长通过连接正方形点的线描绘。