[发明专利]用于传染性皮下及造血器官坏死病毒的实时病毒检测方法和试剂盒

权利要求书

1. 一种用于定量检测生物样品中传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）的方法，包括：

获得如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列的引物对，和如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列的荧光探针；

使用所述引物对和所述荧光探针，通过实时聚合酶链式反应（PCR）扩增生物样品中所述病毒的非结构蛋白编码区；以及

参照阳性对照质粒，确定所述生物样品中所述病毒的存在和数量。

2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物样品是DNA或cDNA模板。

3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生物样品来源于从不同生长环境中收集到的不同发育期的水生动物的组织或整个生物体。

4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述水生动物是罗氏沼虾（Macrobrachium resenbergii）虾种。

5. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述不同发育期包括成年、幼年和幼虫期。

6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述引物对和荧光探针是由IHHNV基因组的非结构蛋白编码区(ORF1)设计的。

7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述荧光探针被合成为在其5'末端带有报告荧光染料并在其3'末端带有非荧光淬灭剂。

8. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述报告荧光染料是5-羧基荧光素（FAM）。

9. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述非荧光淬灭剂是小沟结合物（MGB）。

10. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述阳性对照质粒是从用IHHNV基因组的389bp区域克隆的载体转化的感受态细胞中得到的。

11. 一对用于基于实时聚合酶链式反应（PCR）定量检测生物样品中传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）的引物对，包括如SEQ ID NO: 1和SEQ ID NO: 2所示的核苷酸序列。

12. 根据权利要求11所述的引物对，其特征在于，所述引物对设计成特异性识别和扩增IHHNV基因组中一个非结构蛋白编码区的保守的开放阅读框（ORF1）。

13. 一种用于基于实时聚合酶链式反应（PCR）定量检测生物样品中传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）的荧光探针，包括如SEQ ID NO: 3所示的核苷酸序列。

14. 根据权利要求13所述的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针设计成特异性识别和扩增IHHNV基因组中一个非结构蛋白编码区的保守的开放阅读框（ORF1）。

15. 根据权利要求13所述的荧光探针，其特征在于，在其5'末端具有报道荧光染料并在其3'末端具有非荧光淬灭剂。

16. 根据权利要求15所述的荧光探针，其特征在于，所述报告荧光染料是5-羧基荧光素（FAM）。

17. 根据权利要求15所述的荧光探针，其特征在于，所述非荧光淬灭剂是小沟结合物（MGB）。

18. 一种用于定量检测生物样品中传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）的基于实时聚合酶链式反应（PCR）的扩增试剂盒，包括：

引物对，具有如SEQ ID NO: 1和SEQ ID NO: 2所示的核苷酸序列；和

荧光探针，具有如SEQ ID NO: 3所示的核苷酸序列；以及

PCR预混合物。

19. 根据权利要求18所述的基于实时PCR的扩增试剂盒，其特征在于，所述引物对和荧光探针设计成特异性识别和扩增IHHNV基因组中一个非结构蛋白编码区的保守的开放阅读框（ORF1）。

20. 根据权利要求18所述的基于实时PCR的扩增试剂盒，其特征在于，所述荧光探针在其5'末端具有报道荧光染料并在其3'末端具有非荧光淬灭剂。

21. 根据权利要求18所述的基于实时PCR的扩增试剂盒，其特征在于，所述报告荧光染料是5-羧基荧光素（FAM）。

22. 根据权利要求18所述的基于实时PCR的扩增试剂盒，其特征在于，所述非荧光淬灭剂是小沟结合物（MGB）。