[发明专利]柱上酶切割

权利要求书

1.一种通过在固定化金属离子亲和层析柱上进行蛋白酶切割位点的柱上酶切割从多肽原生产多肽的方法，所述多肽原在其N-或C-末端包含金属离子亲和层析标签和介于所述标签和所述多肽之间的所述蛋白酶切割位点，所述方法包括以下步骤：

-变性结合于金属离子亲和层析材料的多肽原，

-复性结合于金属离子亲和层析材料的多肽原，和

-将结合的多肽原与蛋白酶孵育从而生产所述多肽。

2.一种通过在固定化金属离子亲和层析柱上进行蛋白酶切割位点的柱上酶切割从多肽原生产多肽的方法，所述多肽原在其N-或C-末端包含金属离子亲和层析标签和介于所述标签和所述多肽之间的蛋白酶切割位点，所述方法包括以下步骤：

-将结合的多肽原与包含变性剂的溶液相接触，

-任选地，如果用于之前步骤的包含变性剂的溶液无尿素或尿素衍生物，则将结合的多肽原与包含尿素或尿素衍生物的溶液相接触或如果用于之前步骤的包含变性剂的溶液包含尿素或尿素衍生物和变性剂的混合物，则将结合的多肽原与包含尿素或尿素衍生物的溶液相接触，

-通过将结合的多肽原与蛋白酶孵育从固定化金属离子亲和层析柱回收所述多肽，从而生产多肽。

3.根据在前权利要求中任一项所述的方法，其特征在于所述方法包括在与蛋白酶孵育前直接用无变性剂的溶液的清洗步骤。

4.根据在前权利要求中任一项所述的方法，其特征在于以天然形式回收所述多肽。

5.根据权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于以变性形式回收所述多肽。

6.根据在前权利要求中任一项所述的方法，其特征在于所述变性剂选自盐酸胍，尿素，硫脲，和四甲基脲。

7.根据在前权利要求中任一项所述的方法，其特征在于所述变性剂具有从0.5M至6M的浓度。

8.根据在前权利要求中任一项所述的方法，其特征在于所述尿素或尿素衍生物具有0.5M至8M的浓度。

9.根据在前权利要求中任一项所述的方法，其特征在于以天然形式或以变性形式将所述多肽原应用于固定化金属离子亲和层析材料。

10.根据在前权利要求中任一项所述的方法，其特征在于所述固定化金属离子亲和层析材料是固定化锌亲和层析材料。

11.根据在前权利要求中任一项所述的方法，其特征在于所述蛋白酶选自IgA蛋白酶，胰蛋白酶，或粒酶B。

12.根据在前权利要求中任一项所述的方法，其特征在于所述无变性剂的溶液包含pH值约pH 8的0.5至1.5M Tris。

13.根据在前权利要求中任一项所述的方法，其特征在于所述多肽是非糖基化的多肽。

14.根据在前权利要求中任一项所述的方法，其特征在于所述多肽是载脂蛋白A-I或包含载脂蛋白A-I或人胰岛素样生长因子1(IGF-1)的融合多肽或包含胰岛素样生长因子i(IGF-1)的融合多肽。

15.一种生产多肽的方法，所述方法包括以下步骤：

-用根据权利要求1至14中的任一项所述的固定化金属离子亲和层析方法纯化从包含编码所述多肽的核酸的原核或真核细胞的培养物的培养基获得的多肽，从而生产所述多肽。