[发明专利]用于预防和治疗感染的益生菌来源的无活力的材料

说明书

技术领域

本公开内容涉及自益生细菌菌株、尤其是自鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus Goldin Gorbach, LGG)收获无活力的、生物活性材料的方法。具体地讲，本公开内容涉及对细菌感染具有活性的益生菌(probiotic)来源的材料的制备方法，可由所公开的收获方法获得的益生菌材料，以及涉及包含益生菌来源的材料的饮食或营养产品。

背景技术

阪崎肠杆菌(Cronobacter sakazakii，以前称为Enterobacter sakazakii)是一种与在婴儿、尤其是新生儿重症监护室中的感染暴发相关的条件致病菌。在婴儿中，它可引起菌血症、脑膜炎和坏死性小肠结肠炎(NEC)。由该生物感染所致的婴儿死亡率经报告为40-80%。作为细菌侵入脑部的结果，感染经常导致发育迟缓和认知功能受损。多达20%存活新生儿出现严重的神经学并发症。

因此需要提供一种组合物，其针对阪崎肠杆菌等病原体感染具有防护作用或可治疗所述感染。本公开内容提供组合物，其在新生大鼠模型中对阪崎肠杆菌等病原体向脑部的侵入和死亡率有作用。已经发现，LGG培养上清液减少阪崎肠杆菌向脑和肝的侵入并且甚至完全抑制幼小大鼠的阪崎肠杆菌相关死亡率。

关于这一点，已经体外测试了多种化合物对阪崎肠杆菌的细菌粘附或生长的抑制性能。例如，已经证明，在细胞培养中，益生元寡糖(prebiotic oligosaccharide)抑制阪崎肠杆菌向上皮细胞的粘附(Quintero等人, Curr. Microbiol. 62(5):1448-54)。在扩散测定中，已经描述了由嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)产生的酪蛋白来源的抗微生物肽发挥针对阪崎肠杆菌和大肠杆菌(E. coli)的抗细菌活性(Hayes等人, 2006 Appl. Environ. Microbiol. 第72卷，第3期；2260-2264)。Collado等人(2008 FEMS Microbiol Lett 285 58-64)测试了益生菌菌株阻碍阪崎肠杆菌向分离的人粘液的粘附(在该研究中不包含LGG)。糖醛酸糖已用于在培养基中抑制阪崎肠杆菌生长(WO2009/148312)。总之，许多这些化合物与LGG上清液材料相比具有非常不同的特性和组成。此外，已经在体外测试了所有这些物质并集中在促成感染的发展(例如在培养基中抑制细菌生长或抑制细菌粘附到上皮细胞)的所选方面。尽管细菌粘附和生长等方面可促成感染的发展，但是这些体外测定并不能完全预测在体内对感染的系统下游参数和临床终点的影响。除了保加利亚乳杆菌(L. bulgaricus)(以下详细说明)之外，并未在体内测试上述物质，因此，迄今为止并未证明可在体内实现所提出的防护作用。

关于益生菌或其上清液，这些已被证明在体外能阻止病原体(包括阪崎肠杆菌)向上皮细胞或人粘液的粘附或者在体外抑制病原体生长。例如，Sherman等人(Infect. Immun. 2005 5183-5188)已经证明益生菌在体外在T84上皮细胞中减少了EHEC和ETEC诱导的变化，但是培养上清液和经处理的(tyndallized)细菌(经受热处理或γ辐射)则没有相应作用。Hudeault等人(Appl. Environ. Microbiol 1997 513-518)已经证明，乳杆菌GG (LGG)及其耗尽的培养上清液这两者在体外都减少了鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)侵入，尽管是在较小的程度上。在体内，在相应的鼠伤寒沙门氏菌感染的小鼠模型中，仅测试了活的LGG微生物。De Keersmaecker等人(FEMS Microbiol Lett 2006 259 89-96)表征了LGG上清液在体外针对鼠伤寒沙门氏菌的抗微生物活性。EP1384483公开了已感染旋毛虫(Trichinella spiralis)并用乳酸双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)治疗的小鼠与用培养基MRS治疗的小鼠相比具有较低的虫计数。此外，其它益生菌菌株例如嗜酸乳杆菌具有不同作用和增加或不影响虫载量。重要的是，来自其它病原体研究的发现不能自动转化为阪崎肠杆菌，因为发病机制明显不同。更具体地讲，阪崎肠杆菌可以侵入脑部并引起脑损伤，这对于最常见的胃肠道感染并非是这种情况。