[发明专利]肽和抗体文库及其应用

说明书

相关申请的交叉参考

本申请要求2012年3月31日申请的PCT申请号PCT/CN2012/000430的优先权，其全文引入本文。

发明领域

本发明一般性涉及抗体、抗体文库、多肽、多肽文库及其应用，包括产生抗体文库的方法、鉴别靶的抗体的方法及鉴别与病症相关的靶的方法。在具体的实施方案中，本发明涉及包含至少10000个不同成员的抗体文库，其可用于筛选对于靶如感兴趣的蛋白质具有高亲和性的抗体。

发明背景

在医学、生物学、药学等领域中，不同抗体及抗体文库的需求快速增加。目前，获得抗体的常用方法包括杂交瘤技术、重组抗体技术、多种分子展示技术，以及组合上述技术与高通量方法的那些技术等等。

在常规的抗体制备技术中，通常必需使用天然或重组蛋白质或其片段免疫动物，以使得该动物产生可以特异性识别并结合所述蛋白质的抗体。所述抗体然后可根据不同的要求通过不同的技术方式得自所述动物的细胞。

抗体的获得可包括杂交瘤技术。在这种方法中，在免疫动物之后，需要获取动物细胞及随后进行细胞融合，以获得产生抗体的杂交瘤；然后将杂交瘤克隆并建立株系以产生抗体，随后纯化并鉴别抗体。根据需要，也可以确定抗原的表位。这种杂交瘤技术的详细步骤可见于各种教科书和手册(例如Bazin,Rat hybridomas and rat monoclonal antibodies,CRC Press,1990；Goding,Monoclonal antibodies:principles and practice,3^rd edition,Academic Press,1996；Shepherd and Dean Monoclonal antibodies,Oxford University Press,2000等)。目前这些方法仍广泛用于抗体制备，但是它们有许多缺点，如较长的制备周期、非常复杂的制备技术及高成本。此外，这些方法不能用于所有蛋白质，例如对于具有不佳溶解性、低免疫原性或毒性的一些抗原，这些方法是不适用的(Sinclair NR et al.,2004B cell/antibody tolerance to our own antigens.Front Biosci 9:3019–3028)。

此外，为了获得具有特异性的单克隆抗体，常用的方式是将化学合成的肽片段与载体蛋白质偶联，然后使用其免疫小鼠。这种方法可产生针对相同蛋白质的单一表位的抗体。然而，由于不同肽片段的免疫原性的不同，这种方案的整体成功率不够好，特别是对于示出与宿主具有高同源性的蛋白质，其肽具有非常差的免疫原性，且在小鼠中难以刺激有效的免疫反应。另一常规策略是使用全长蛋白质或其片段作为免疫原，这个策略部分解决了上述问题，但是仍存在一些其它缺陷，如在蛋白质表达中低整体成功率(对于正常表达和纯化系统为30-70％)(Thorsten Kohl,Christian Schmidt,Stefan Wiemann,Annemarie Poustka and Ulrike Korf.Drew,2003)。对于使用的与宿主动物具有高同源性的蛋白质片段，其在动物中的免疫应答通常较弱，且制备单克隆抗体的成功率相对较低(Sinclair NR et al,2004,Automated production of recombinant human proteins as resource for proteome research,Proteome Science 2008,6:4；Sinclair NR(2004)B cell/antibody tolerance to our own antigens.Front Biosci 9:3019–3028)。