[发明专利]在用于蛋白质表达的细胞系中减少酰胺化的氨基酸形成

权利要求书

1.一种用于蛋白质表达的细胞，其具有降低的肽酰胺化活性。

2.如权利要求1所述的细胞，其特征在于，所述降低的肽酰胺化活性是通过如下方式实现的：

a)抑制或降低编码用于催化肽α－酰胺化的酶的基因的基因表达；

b)表达功能异常或失活的用于催化肽α－酰胺化的酶，或者表达具有降低活性的用于催化肽酰胺化的酶；和/或

c)抑制或降低用于催化肽α－酰胺化的酶的活性。

3.一种用于在给定细胞中降低肽酰胺化活性的方法，该方法包括选自下列集合中的至少一步骤：

a)抑制或降低编码用于催化肽α－酰胺化的酶的基因的基因表达；

b)表达功能异常或失活的用于催化肽α－酰胺化的酶，或者表达具有降低活性的用于催化肽酰胺化的酶；和

c)抑制或降低用于催化肽α－酰胺化的酶的活性。

4.如上述任一权利要求所述的细胞或方法，其特征在于，降低的肽酰胺化活性是通过对编码催化肽α-酰胺化的酶的基因进行下述至少一种改造方式来实现的：

基因沉默；

基因抑制；

基因敲除；

显性负构造体的引入；

条件性基因敲除；和

基因变异。

5.如上述任一权利要求所述的细胞或方法，其特征在于，所述细胞是指真核细胞。

6.如上述任一权利要求所述的细胞或方法，其特征在于，所述细胞是指动物细胞和/或植物细胞。

7.如上述任一权利要求所述的细胞或方法，其特征在于，所述细胞是指哺乳动物细胞。

8.如上任一权利要求所述的细胞或方法，其特征在于，所述细胞是指重组细胞。

9.如上述任一权利要求所述的细胞或方法，其特征在于，所述细胞是选自下述集合中的至少一种：

幼仓鼠肾细胞(例如BHK21)；

中国仓鼠卵巢细胞(例如CHO-K1、CHO-DG44、CHO-DXB或CHO-dhfr)；

小鼠骨髓瘤细胞(例如SP2/0或NS0)；

人类胚胎肾细胞(例如HEK-293)；

人类视网膜源细胞(例如PER-C6)；和

羊水细胞(例如CAP)。

10.如上述任一权利要求所述的细胞或方法，其特征在于，用于催化肽酰胺化的酶是肽酰甘氨酸α-酰胺化单加氧酶(PAM)。

11.如上述任一权利要求所述的细胞或方法，其特征在于，用于催化肽酰胺化的所述酶的编码基因的基因表达是通过RNA干扰(RNAi)的方式被抑制或降低。

12.如上述任一权利要求所述的细胞或方法，其特征在于，用于催化肽酰胺化的酶催化C-末端脯氨酸酰胺残基的形成。

13.如上述任一权利要求所述的细胞在同源蛋白的表达上的用途。

14.如上述任一权利要求所述的细胞在异源蛋白的表达上的用途。

15.如权利要求13或14所述的用途，其中，所述蛋白质是选自如下集合中的至少一种蛋白质：

抗体或其片段或其衍生物；

融合蛋白；

抗体类似物；和

非抗体蛋白质。