[发明专利]同种异型抗原‑反应性调节T细胞的增殖

权利要求书

1.一种用于生产人类供体-反应性调节T细胞(Treg)的方法，包括：

a)在有效生产刺激的B细胞(sBc)的条件下，使人类供体与经辐射的CD40L+人类白血病饲养细胞共培养；

b)在有效地选择性地增殖人类供体-反应性调节T细胞(Treg)的条件下，使人类受体的CD4+、CD25+、CD127-/lo T细胞与所述的sBc共培养，和

c)在有效生产CD4+、Helios+且Foxp3+的再刺激的供体-反应性Treg的条件下，通过所述供体-反应性Treg的CD3与CD28的交联来再刺激所述供体-反应性Treg，

其中所述供体相对于所述人类受体是HLA错配的。

2.权利要求1所述的方法，其中所述的HLA错配包括HLA-A、HLA-B、HLA-C和HLA-DR中的至少1个、2个、3个或4个错配。

3.权利要求2所述的方法，其中所述的步骤c)在所述的步骤b)开始后的9-12天开始。

4.权利要求2所述的方法，其中所述的供体-反应性Treg为CD27+、CD62L+。

5.权利要求2-4任一项所述的方法，其进一步包括在所述的a)之前，由所述的人类受体获得的冷冻保藏的外周血单个核细胞(PBMC)通过荧光激活细胞分类(FACS)分离CD4+、CD25+、CD127-/lo T细胞的步骤。

6.权利要求2-4任一项所述的方法，其中所述的步骤a)包括将所述的 B细胞和所述的饲养细胞在包括胰岛素、转铁蛋白、白细胞介素-4和环孢霉素A的培养基中共培养。

7.权利要求2-4任一项所述的方法，其中所述的步骤b)包括在所述的sBc经受辐射之后，将所述的sBc和所述的CD4+、CD25+、CD127-/lo T细胞在包括白细胞介素-2的培养基中共培养。

8.权利要求2-4任一项所述的方法，其中所述的再刺激的供体-反应性Treg在所述的步骤b)开始时，包括是所述的CD4+、CD25+、CD127-/lo T细胞的200倍至2000倍的细胞。

9.一种组合物，其包括使用权利要求2-4的任意一项所述的方法生产的再刺激的供体-反应性Treg、以及生理学可接受的缓冲剂，其中所述供体-反应性Treg为>95％CD4+，>60％Foxp3+，>90％具有去甲基化的Foxp3启动子，>90％供体-反应性的；并且在Treg:应答者PBMC的比例为1:125时抑制供体刺激的T细胞的增殖。

10.一种治疗或预防人类受体对实体器官同种异型移植物的排斥的药剂，所述的药剂包括：使用权利要求2所述的方法生产的10⁷至10¹¹的再刺激供体-反应性Treg。

11.权利要求10所述的药剂，其中所述的实体器官同种异型移植物选自心脏、肺、肾、胰腺、肝脏、肠和皮肤同种异型移植物。

12.权利要求10所述的药剂，其中所述的药剂在降低急性和/或慢性排斥的可能性中是有效的。

13.权利要求10-12任一项所述的药剂，其中所述的药剂有效地将Treg百分率升高至基线以上，增加供体-反应性Treg的频率，增加供体-反应性Treg活性，以及在PBMC和/或移植组织中诱导耐受基因表达图谱。

14.权利要求10-12任一项所述的药剂，其中在所述的人类受体经历Treg支持的免疫抑制方案之后，将所述的药剂给予所述的人类受体，其中所述的药剂包括有效去除淋巴细胞的量的兔抗胸腺细胞球蛋白。

15.权利要求10-12任一项所述的药剂，其中将所述的药剂给予所述的人类受体，同时给予低于护理标准的剂量的泼尼松、霉酚酸酯和他克莫司。

16.权利要求10-12任一项所述的药剂，其中将所述的药剂给予所述的人类受体，同时给予西罗莫司。