[发明专利]用于监测HIV特异性T细胞应答的方法

说明书

技术领域

本发明总体涉及用于监测HIV特异性T细胞应答和鉴定能够控制HIV发展或预防HIV感染之对象的方法和诊断试剂盒。

背景技术

人免疫缺陷病毒(HIV)序列多样性是在体外可靠评估抗病毒T细胞免疫和设计有效且广泛适用的HIV疫苗的主要障碍。参见Brander C等，Curr.Opin.Immunol.2006；18(4)：430-437。

尽管在全基因组水平上具有广泛的HIV序列多样性，但是病毒蛋白质在个别位置的变化通常局限于在不同HIV进化枝中重现或“切换(toggle)”的有限数量的氨基酸替换。参见Gaschen B等，Science 2002；296：2354-2360。切换残基(toggling residue)通常包括氨基酸对例如精氨酸(R)和赖氨酸(K)或者亮氨酸(L)和缬氨酸(V)，这些氨基酸对在生物化学上类似，因此可能被病毒耐受而不严重影响其复制效率。显著地，大部分Gag p24(高保守蛋白质的代表)切换肽(toggled peptide)混合物仅需要不到20种变体(中值为4)，即使在最高水平的序列覆盖率(即，仅从切换位置排除存在于＜5％的数据库序列中的氨基酸)下也是如此，而在该覆盖率下在其他Gag亚基中变体数目更高。参见Yusim K等，J.Virol.2002；76(17)：8757-8768。在IFN-γElispot测定中，已经表明，与匹配的共有序列肽相比，这些“切换”肽检测HIV特异性CD4+和CD8+T细胞应答的幅度(breath)和量级(magnitude)显著更高。参见Frahm N等，J.Immunol.2007；179：6638-6650。

用于HIV疫苗接种的免疫原候选物的大部分研究以通过Elispot分析IFN-γ产量为基础。迄今，没有发现IFN-γ的量级或分泌与病毒载量之间的直接相关性。在过去的数年，已经发现针对HIV抗原决定簇的T细胞应答的质量可能是引起针对病毒的有效应答的关键决定性因素。然而，对HIV感染患者中CD8+T淋巴细胞的多功能应答(例如，分泌不同细胞因子和穿孔胞吐)的分析已经表明T淋巴细胞的多功能能力与病毒载量之间的负相关性。另外，流式细胞术和基于Elispot的分析可能无法检测与非定期测量或未表现出预期的一种或更多种效应功能谱之细胞因子相关的应答。因此，本领域需要更灵敏和综合的方法以评估针对HIV的T细胞应答。

发明内容

在第一个方面，本发明涉及一种用于测定对象中特异性针对病原体的T细胞应答的方法，其包括：i)使包含来自所述对象之T细胞的样品与包含来自所述病原体之抗原的组合物接触，以及ii)测定由所述样品中的T细胞产生的多种细胞因子的水平。

在第二个方面，本发明涉及一种用于鉴定高度暴露的持续血清反应阴性患者的方法，其包括：i)用HIV或EBV肽组合物孵育含有所述患者之T细胞的样品，以及ii)测定选自IL-1b、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-12p70、IL-13、IL-17和IL-22的一种或更多种细胞因子的水平，其中一种或更多种所述细胞因子的表达水平相对于参考值升高表明所述患者是高度暴露的持续血清反应阴性患者。

在第三个方面，本发明涉及一种试剂盒，其包含用于检测选自IL-1b、IL-5、IL-6、IL-9、IL-10、IL-12p70、IL-13、IL-17和IL-22的一种或更多种细胞因子的试剂。

在第四个方面，本发明涉及一种用于鉴定高度暴露的持续血清反应阴性患者的方法，其包括：i)用来源于HIV蛋白或EBV蛋白的肽组合物孵育所述患者的含有T细胞的样品，以及ii)测定Th1样应答、Th2样应答或Th17应答，其中所述细胞中Th1样应答、Th2样应答或Th17应答相对于参考值升高表明所述患者是高度暴露的持续血清反应阴性患者。

附图简述

图1.仅由切换肽刺激引起的细胞应答。HIV患者在幅度和量级方面均比HEPS个体表现出更高的应答。在控制者组和非控制者组之间未观察到显著统计学差异。在HEPS组还检测到了较少和较弱的应答。