[发明专利]生产型细胞系的增强子

说明书

本发明涉及在生产型细胞中异位表达EDEM2从而改善有用的多亚基蛋白质的产率的发现。因此，本发明提供了包含编码EDEM2的重组多核苷酸的生产型细胞系，例如经典的哺乳动物生物制药生产型细胞—CHO细胞。此外，本发明还公开了包含EDEM2的编码多核苷酸以及XBP1的编码多核苷酸的生产型细胞。也公开由这些细胞系生产的抗体的改善效价以及培养中由这些细胞得到的改善的细胞密度。

相关申请的交叉引用

根据35U.S.C.§119(e)，本申请要求2012年5月29日提交的美国临时专利申请号61/652,549的权益，该申请的全部内容明确地以引用方式并入本文。

技术领域

本申请涉及一种或多种细胞，其表达用于改善地生产多亚基蛋白质的重组应激反应凝集素。具体而言，本发明提供了包含编码EDEM2的基因的哺乳动物细胞及由其衍生的细胞系，并且其产生高效价的抗体。

背景技术

制造治疗活性的蛋白质需要在分泌之前进行适当的折叠和加工。适当的折叠与蛋白质(例如抗体)尤其相关，所述的蛋白质由多个亚基组成，这些亚基在分泌之前必须适当地组装。真核细胞适应这样的系统，该系统确保蛋白质适当地折叠，并除去分泌途径中错误折叠的蛋白质。该系统被称为未折叠蛋白质反应(UPR)途径，并且由错误折叠的蛋白质在内质网(ER)中的累积所引发。

UPR的早期事件是转录因子Xbp1的激活，其依次激活内质网降解增强α-甘露糖苷酶-样蛋白质2(EDEM2)的转录，而该内质网降解增强α-甘露糖苷酶-样蛋白质2为内质网相关性降解(ERAD)途径的成员。EDEM2促进了错误折叠蛋白质的去除。ERAD途径包含5个步骤：(1)分子伴侣介导的对畸形蛋白质的识别；(2)使畸形蛋白质靶向与EDEM2有关的逆向转运机制或E3连接酶；(3)逆向转运的引发；(4)泛素化及进一步逆向转运；以及(5)蛋白体靶向及降解。

抗体为包含两条重链和两条轻链的多亚基蛋白质，其必须适当地折叠并结合从而形成功能异四聚体。为了改善功能抗体异四聚体的产率或效价，对重链和轻链的高效和精确加工的任何改良以都是需要的。

发明概述

本申请人惊奇地发现，在制造蛋白质的细胞系中，EDEM2的异位表达增加蛋白质的平均产量/细胞，增加被分泌至培养基中的蛋白质的效价，并增加生产型细胞系的积分细胞密度。

因此，在一个方面中，本发明提供了细胞，其包含(a)编码应激诱导的甘露糖结合凝集素的重组多核苷酸和(b)编码多亚基蛋白质的多核苷酸。在一些实施方案中，应激诱导的甘露糖结合凝集素为EDEM2蛋白质，其非限定性的实例在表1中提供，并且多亚基蛋白质为抗体。在其他的实施方案中，所述的细胞还包含编码活性剪切形式的XBP1的多核苷酸，其非限定性的实例在表2中提供。在一个实施方案中，所述的细胞为哺乳动物细胞，例如在生物制药制造中使用的CHO细胞。

在另一个方面中，本发明提供了由在上一方面中所述的细胞衍生的细胞系。“由……衍生”的意思是指由单个细胞以克隆方式遗传并具有一些所选的品质的细胞群体，例如生产给定效价的活性蛋白质的能力或增殖至特定密度的能力。在一些实施方案中，所述的细胞系能够生产效价为至少3克/升培养基(g/L)、至少5g/L或至少8g/L的多亚基蛋白质，其中所述的细胞系衍生自容留编码应激诱导的甘露糖结合凝集素的重组多核苷酸和编码多亚基蛋白质的多核苷酸的细胞。在一些实施方案中，与由基本相同的细胞衍生的但不具有编码应激诱导的甘露糖结合凝集素的重组多核苷酸的细胞系所获得的积分细胞密度相比，所述的细胞系可以获得高至少30％、至少50％、至少60％或者至少90％的积分细胞密度(ICD)。