[发明专利]用于诱导和扩增源自外周血单个核细胞的自然杀伤细胞的方法

说明书

本发明涉及一种诱导和扩增源自外周血单个核细胞的自然杀伤（NK）细胞的方法，其中该方法包括：在存在细胞因子的条件下，将作为饲养细胞的经辐射的Jurkat细胞和经辐射的由EB病毒转化的连续性淋巴细胞株（EBV‑LCL）细胞与外周血单个核细胞进行共培养。根据本发明，可以从少量的外周血单个核细胞中诱导及增殖大量的NK细胞，而无需使用昂贵的设备或各种昂贵的细胞因子，从而可显著提高将所述NK细胞用于癌症时的预防和治疗的效率和效能。

技术领域

本发明涉及一种用于诱导和扩增源自外周血单个核细胞的自然杀伤细胞的方法。

背景技术

免疫反应能从病原体中保护人体，且免疫系统由众多免疫相关细胞和细胞因子组成。白细胞，尤其淋巴细胞在免疫系统中起重要作用。组成淋巴细胞的代表性细胞包括先天免疫系统细胞和后天免疫系统细胞。自然杀伤细胞（NK细胞）是一种具代表性的先天免疫细胞，已知自然杀伤细胞能以非特异性方式杀伤癌，识别并杀伤病毒、细菌等，而且可以用酶如穿孔素和颗粒酶杀伤病原体，或通过Fas-FasL相互作用杀伤病原体。据报告称，对于癌症患者而言，NK细胞的杀伤癌细胞的能力的降低与肺癌（Carrega P, et al., Cancer,2008: 112: 863-875）、肝癌（Jinushi M, et al., J Hepatol., 2005: 43; 1013-1020）、乳癌（Bauernhofer T, et al., Eur J Immunol., 2003: 33: 119-124）、子宫癌（Mocchegiani E., et al., Br j Cancer., 1999: 79: 244-250）、血癌（Tajima F., etal, Lekemia 1996: 10: 478-482）等疾病的发病紧密相连。因此，为了癌症治疗，必须要提高癌症患者的自然杀伤细胞的有关杀伤癌细胞的能力及活性。目前，尝试着利用如NK细胞的损伤癌细胞的能力来治疗实体癌（solid cancer）或血癌。

为了获得杀伤癌细胞的效果，而需要大量的NK细胞，但难以保证从癌症患者中能够获得大量血液，且血液中的NK细胞的量所占的比例也仅仅约5～20%。由于难以使用NK细胞作为免疫治疗剂，从而重点在于能够有效地扩张并增殖NK细胞。常用于扩增NK细胞的现有方法包括，利用如磁激活细胞分选（magnetic activated cell sorter，MACS）、cliniMACS或荧光激活细胞分选（fluorescence activated cell sorter，FACS）等装置从骨髓或血液的单个核细胞中分离或诱导出NK细胞。在这种方法中，进行如下操作：1）在早期，从单个核细胞中分离NK细胞，并利用细胞因子对NK细胞进行扩增培养；2）去除与单个核细胞共存的T细胞，并利用细胞因子对NK细胞进行扩增培养；及3）在骨髓中存在的干细胞中诱导NK细胞。此外，根据已有的报告，通过利用饲养细胞从外周血单个核细胞（PBMCs）中分离NK细胞的方法包括，意大利Torelli研究小组的利用源自B细胞白血病的RPMI8866细胞株的方法和日本Ishikawa研究小组的利用源自肾母瘤细胞（Wilms tumor cell）的HFWT细胞株的方法。

然而，由于需要精良的设备来选择细胞进行预扩增，并使用基因工程饲养细胞和昂贵的高浓度的各种细胞因子，从而使本领域中有报道的NK细胞的扩增方法受到了阻碍，进而普遍使用来可能过于昂贵，更加难以向病患群体实施该方法，其可用性受到了限制。

发明内容

技术问题

本发明涉及提供一种新型的用于诱导和扩增源自外周血的NK细胞的方法，从而引导出有效的策略，来获得活化的源自外周血的NK细胞，而无需使用昂贵的设备、资源或不受监管所约束。

技术方案

为了解决这些问题，本发明的一方面提供一种有选择地诱导和扩增源自外周血单个核细胞的NK细胞的方法，该方法包括以下的简化方法：在存在细胞因子的条件下，将作为饲养细胞的经辐射的Jurkat细胞和经辐射的EBV-LCL细胞与外周血单个核细胞会以限定的比例及浓度进行共培养。