[发明专利]组合的γ9δ2T细胞受体链交换

权利要求书

1.一种用于鉴定介导抗肿瘤响应的γ9δ2T-细胞受体的方法，包括以下步骤：

a)提供T-细胞；

b)提供包括γ9-CDR3编码区的编码γ9-T-细胞受体链的核酸序列和包括δ2-CDR3编码区的编码δ2-T-细胞受体链的核酸序列，其中所述编码γ9-T-细胞受体链的核酸序列编码与SEQ ID NO.1的氨基酸序列具有至少60％序列同一性的氨基酸序列，其中所述γ9-CDR3编码区被随机修饰，其中所述编码δ2-T-细胞受体链的核酸序列编码与SEQ ID NO.2的氨基酸序列具有至少60％序列同一性的氨基酸序列，且其中所述δ2-CDR3编码区被随机修饰；

其中所述γ9-CDR3编码区在与SEQ ID NO.1的氨基酸残基122-124对应的氨基酸序列处被随机修饰，和/或其中所述被随机修饰的δ2-CDR3编码区在与SEQ ID NO.2的氨基酸残基115-122对应的氨基酸序列处被修饰，

c)将步骤b)的核酸序列引入到T-细胞中，以提供具有包括步骤b)的γ9-T-细胞受体链和步骤b)的δ2-T-细胞受体链的γ9δ2T-细胞受体的工程化T-细胞；

d)任选地，重复步骤b)和c)；

e)确定在步骤c)和d)中提供的工程化T-细胞的抗肿瘤响应；

f)鉴定介导抗肿瘤响应的工程化T-细胞的γ9δ2T-细胞受体。

2.根据权利要求1所述的方法，其中随机修饰与δ2-CDR3编码区对应的氨基酸序列包括长度上的修饰。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中随机修饰氨基酸序列包括引入氨基酸替换、缺失和/或插入。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述编码γ9-T-细胞受体链的核酸序列在表达载体中提供，且所述编码δ2-T-细胞受体链的核酸序列在表达载体中提供，或其中所述编码γ9-T-细胞受体链的核酸序列和所述编码δ2-T-细胞受体链的核酸序列在单个表达载体中提供。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述编码γ9-T-细胞受体链的核酸序列在逆转录病毒载体中提供，且所述编码δ2-T-细胞受体链的核酸序列在逆转录病毒载体中提供，或其中所述编码γ9-T-细胞受体链的核酸序列和所述编码δ2-T-细胞受体链的核酸序列在单个逆转录病毒载体中提供，且其中将核酸序列引入到T-细胞中的步骤包括T-细胞的逆转录病毒载体转导。

6.根据权利要求1所述的方法，其中确定抗肿瘤响应的步骤包括将所述工程化T-细胞与肿瘤细胞接触，和测量其裂解所述肿瘤细胞和/或诱导IFN-γ的能力。