[发明专利]用于生产葡萄糖聚合物和葡萄糖聚合物的水解产物的净化回路的方法

权利要求书

1.一种用于试验一个生产步骤或多个生产步骤对葡萄糖聚合物或其水解产物中促炎分子的存在或其性质的影响或一个纯化步骤或多个纯化步骤对葡萄糖聚合物或其水解产物中促炎分子的存在或其性质的效力的方法，该方法包括：

a)提供葡萄糖聚合物或其水解产物；

b)检测或测定步骤a)中提供的葡萄糖聚合物或其水解产物中的促炎分子；

c)对步骤a)中提供的葡萄糖聚合物或其水解产物进行该一个或多个生产或纯化步骤；

d)检测或测定步骤c)后获得的葡萄糖聚合物或其水解产物中的促炎分子；

e)通过比较步骤b)和d)中检测或测定的、所述葡萄糖聚合物或其水解产物中的促炎分子，确定步骤c)对这些促炎分子的存在或性质的效力，促炎分子或这些分子中的一些的量的减少指示步骤c)的效力；

其中用于检测或测定这些葡萄糖聚合物或其水解产物中的促炎分子的步骤包括使用细胞系进行的体外炎症应答试验，其中该体外炎症应答试验包括使得这些葡萄糖聚合物或其水解产物与以下各项相接触：

a.表达TLR2受体和报告基因的细胞系，该报告基因的转录是在TLR2信号通路的直接控制下，通过测量该报告基因的活性或信号来检测或测定这些促炎分子；和

b.表达NOD2受体和报告基因的细胞系，该报告基因的转录是在NOD2信号通路的直接控制下，通过测量该报告基因的活性或信号来检测或测定这些促炎分子，

其中所述促炎分子选自PGN(肽聚糖)、脂肽、PGN解聚产物和MDP(胞壁酰二肽)。

2.如权利要求1中所述的方法，其中该体外炎症应答试验还包括使得这些葡萄糖聚合物或其水解产物与未经受免疫受体转染的对照系相接触。

3.如权利要求1或2中所述的方法，其中该体外炎症应答试验还包括使得这些葡萄糖聚合物或其水解产物与MDP-或LPS-敏化的、巨噬细胞-分化的THP-1细胞系相接触，通过测量由该细胞系产生的RANTES或TNF-α的量来检测或测定这些促炎分子。

4.如权利要求1或2中所述的方法，其中该体外炎症应答试验还包括使得这些葡萄糖聚合物或其水解产物与用报告基因转染的巨噬细胞系相接触，该报告基因的转录是在炎症信号通路的直接控制下，通过测量该报告基因的活性或信号来检测或测定这些促炎分子。

5.如权利要求4中所述的方法，其中所述巨噬细胞系是Raw-Blue^TM系。

6.如权利要求1或2中所述的方法，其中表达TLR2受体和报告基因的细胞系是HEK-Blue^TM hTLR2系。

7.如权利要求1或2中所述的方法，其中该体外炎症应答试验还包括使得这些葡萄糖聚合物或其水解产物与表达TLR4受体和报告基因的细胞系相接触，该报告基因的转录是在TLR4信号通路的直接控制下，通过测量该报告基因的活性或信号来检测或测定这些促炎分子。

8.如权利要求7中所述的方法，其中所述细胞系是HEK-Blue^TM hTLR4系。

9.如权利要求1或2中所述的方法，其中表达NOD2受体和报告基因的细胞系是HEK-Blue^TM hNOD2系。

10.如权利要求2中所述的方法，其中所述对照系是HEK-Blue^TM Null2系。

11.如权利要求1或2中所述的方法，其中该一个或多个生产或纯化步骤选自以下步骤：热处理、酸化、穿过活性炭、穿过吸附树脂、过滤、或化学或酶水解、或其组合。

12.如权利要求11中所述的方法，其中所述生产或纯化步骤是超滤。

13.如权利要求1或2中所述的方法，其中这些葡萄糖聚合物选自艾考糊精和麦芽糊精，并且这些葡萄糖聚合物水解产物是完全水解的产物。

14.如权利要求1或2中所述的方法，其中用30kDa的截取阈值预过滤葡萄糖聚合物或其水解产物的样品，并且使滤液与试验中使用的细胞系相接触。