[发明专利]增强转基因植物中的蛋白稳定性

权利要求书

1.核酸构建体，其包含与编码融合蛋白的核酸可操作连接的植物可操作启动子，其中所述融合蛋白包含第一蛋白区段和第二蛋白区段，其中所述第一蛋白区段是感兴趣的蛋白，所述第二蛋白区段是蛋白的UBA结构域，其中所述第二蛋白区段与所述第一蛋白区段的C-末端融合，并且当所述融合蛋白在植物细胞中表达时，所述UBA结构域稳定所述感兴趣的蛋白。

2.权利要求1的核酸构建体，其中所述核酸包含编码所述感兴趣的蛋白的第一核酸区段和编码所述UBA结构域的第二核酸区段。

3.权利要求1或2的核酸构建体，其中所述UBA结构域选自：

(a)拟南芥RAD23蛋白的UBA1结构域；

(b)拟南芥RAD23蛋白的UBA2结构域；

(c)酵母RAD23蛋白的UBA2结构域；

(d)拟南芥DDI1蛋白的UBA结构域；

(e)酵母Ddil蛋白的UBA结构域；

(f)拟南芥UBL1蛋白的UBA结构域；

(g)拟南芥DSK2a蛋白的UBA结构域；

(i)拟南芥DSK2b蛋白的UBA结构域；

(j)拟南芥NUB1蛋白的UBA1结构域；和

(k)拟南芥NUB1蛋白的UBA2结构域。

4.权利要求3的核酸构建体，其中所述拟南芥RAD23蛋白选自拟南芥RAD23a蛋白、拟南芥RAD23b蛋白、拟南芥RAD23c蛋白和拟南芥RAD23d蛋白。

5.权利要求1或2的核酸构建体，其中所述第二蛋白区段是选自天然UBA结构域和所述天然UBA结构域的保守变体的UBA结构域。

6.权利要求5的核酸构建体，其中所述UBA结构域是拟南芥RAD23蛋白的天然UBA1结构域或所述拟南芥RAD23蛋白的天然UBA1结构域的保守变体，其中所述天然UBA1结构域具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:l所示的氨基酸序列、SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列、SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列、SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列和SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列。

7.权利要求5的核酸构建体，其中所述UBA结构域是拟南芥RAD23蛋白的天然UBA2结构域或所述拟南芥RAD23蛋白的所述天然UBA2结构域的保守变体，其中所述天然UBA2结构域具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列、SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列、SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列、SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列和SEQ ID NO:18所示的氨基酸序列。

8.权利要求5的核酸构建体，其中所述UBA结构域是天然UBA结构域或所述天然UBA结构域的保守变体，其中所述天然UBA结构域具有选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列、SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列、SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列、SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列、SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列、SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列、SEQ ID NO:24所示的氨基酸序列、SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列、SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列、SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列、SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列、SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列、SEQ ID NO:30所示的氨基酸序列、SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列和SEQ ID NO:32所示的氨基酸序列。

9.权利要求1的核酸构建体，其中所述感兴趣的蛋白是在转基因植物细胞或转基因植物中待表达的蛋白。

10.融合蛋白，其由权利要求1-9任一项的核酸构建体编码。

11.转基因植物细胞、转基因植物或转基因种子，其包含权利要求1-9任一项的核酸构建体。

12.权利要求11的转基因植物细胞、转基因植物或转基因种子，其中所述融合蛋白在所述转基因植物细胞、转基因植物或转基因植物种子中表达。

13.权利要求12的转基因植物，其中表达的融合蛋白给予所述转基因植物表型特征。

14.增强表达的蛋白在转基因植物细胞或转基因植物中的稳定性的方法，包含：

(a)用权利要求1-8任一项的核酸构建体转染植物细胞以产生具有所述核酸构建体的转基因植物细胞；

(a1)任选地由所述转基因植物细胞再生转基因植物；和

(b)在所述转基因植物细胞或所述转基因植物中表达所述融合蛋白，

由此表达的融合蛋白在所述转基因植物细胞或所述转基因植物中比相应的感兴趣的蛋白更稳定，并且在所述转基因植物细胞或所述转基因植物中具有与相应的感兴趣的蛋白相同的功能。