[发明专利]具有改善的凝乳性质的凝乳酶变体

说明书

具有改善的凝乳性质的凝乳酶变体。

发明领域

本发明涉及具有改善的凝乳性质的凝乳酶变体。

发明背景

利用凝乳酶类(例如凝乳酶及胃蛋白酶)对乳的酶法凝固是奶酪生产中最重要工艺中的一个。酶法乳凝固是一个两阶段工艺：第一阶段，其中蛋白水解酶、凝乳酶或胃蛋白酶攻击κ-酪蛋白，导致酪蛋白胶束结构的亚稳态以及第二阶段，其中乳随后凝固并形成凝固物。

凝乳酶(EC 3.4.23.4)及胃蛋白酶(EC 3.4.23.1)(哺乳动物胃中的凝乳酶类)是属于肽酶中一大类的天冬氨酸蛋白酶。

当在胃黏膜细胞中产生时，凝乳酶以及胃蛋白酶分别是以无酶学活性的凝乳酶原前体以及胃蛋白酶原前体存在。当分泌凝乳酶时，N-端肽片段，即片段前体(信号肽)被切除以产生包含片段原(pro-fragment)的凝乳酶原。凝乳酶原是一种基本上无活性形式的酶，但是，其在酸性条件下会因片段原的自催化移除而被激活成为活性凝乳酶。此激活在适宜的pH条件下在胃腔中体内发生或在酸性条件下体外发生。

已对牛(即Bos Taurus)的结构以及功能特征、凝乳酶原前体、凝乳酶原以及凝乳酶进行了深入地研究。牛凝乳酶原前体分子的前体部分(pre-part)包含16aa残基，对应的凝乳酶原的原体部分(pro-part)具有42aa残基的长度。活性牛凝乳酶包含323aa，是两种皆具有活性的形式A及B的混合物。

凝乳酶是在哺乳动物种中自然地产生的，所述种例如牛、骆驼、山羊、水牛、绵羊、猪、人、猴以及大鼠。

多年来，牛凝乳酶可商用于乳品工业。

WO02/36752A2(Chr.Hansen)描述了骆驼凝乳酶之重组制造。

以下随即列出的参考文献可在本发明的上下文中视为描述凝乳酶的突变体的参考文献：

-Suzuki等:Site directed mutagenesis reveals functional contributionof Thr218,Lys220and Asp304in chymosin(定点诱变揭露凝乳酶中Thr218、Lys220以及Asp304的功能性分布),Protein Engineering,第4卷,1990年1月,69-71页；

-Suzuki等:Alteration of catalytic properties of chymosin by site-directed mutagenesis(通过定点诱变改变凝乳酶的催化性质),Protein Engineering,第2卷,1989年5月,563-569页；

-van den Brink等:Increased production of chymosin by glycosylation(通过糖基化增产凝乳酶),Journal of biotechnology,第125卷,2006年9月,304-310页；

-Pitts等:Expression and characterisation of chymosin pH optimamutants produced in Tricoderma reesei(瑞氏木霉中产生的凝乳酶pH最适宜突变体的表达以及表征),Journal of biotechnology,第28卷,1993年3月,69-83页；

-M.G.Williams等:Mutagenesis,biochemical characterization and X-raystructural analysis of point mutants of bovine chymosin(牛凝乳酶的点突变体的诱变、生化表征以及X-射线结构分析),Protein engineering design and selection,第10卷,1997年9月,991-997页；