[发明专利]用于生产萜烯的方法

权利要求书

1.用于在真菌中生产萜烯的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)提供在宿主细胞中的修饰的萜烯生物合成基因簇，所述基因簇具有天然存在的萜烯生物合成基因和启动子，其中一个或多个这些基因或启动子已被取代、截短或移除；

(b)提供在所述宿主细胞中的转录因子，使得所述转录因子与天然或修饰的启动子中的一个操作性连接，所述转录因子激活具有萜烯生物合成基因和与所述基因操作性连接的调节区的萜烯生物合成基因簇；

(c)在允许所述激活簇的转录因子表达的条件下培养所述宿主；和

(d)任选回收由此产生的萜烯产物。

2.权利要求1的方法，其中萜烯是萜类化合物，优选半萜、单萜、倍半萜、二萜、三萜或四萜，优选单萜、倍半萜或二萜，最合适的是单萜。

3.权利要求1或2的方法，其中萜烯是γ-萜品烯、柠檬烯、伞花烃或桉油醇，最优选γ-萜品烯。

4.权利要求1或2的方法，其中萜烯是α-法呢烯、紫穗槐二烯、杜松烯、石竹烯或红没药烯，最优选法呢烯。

5.权利要求1或2的方法，其中萜烯是紫杉二烯、贝壳杉烯、fusicoccadiene、casbene或松香二烯，最优选紫杉二烯。

6.前述权利要求中任一项的方法，其中所述宿主细胞携带具有萜烯生物合成基因的条目(a)的萜烯生物合成基因簇。

7.前述权利要求中任一项的方法，其中将具有萜烯生物合成基因的萜烯生物合成基因簇转化到宿主细胞中。

8.前述权利要求中任一项的方法，其中所述生产宿主包含编码转运蛋白的基因。

9.前述权利要求中任一项的方法，其中所述转录因子具有序列SEQ ID NO：52或与SEQ ID NO：52显示至少80％同一性的序列。

10.权利要求9的方法，其中所述转录因子具有序列SEQ ID NO：52或与所述序列显示至少85％同一性的序列。

11.前述权利要求中任一项的方法，其中所述真菌宿主选自曲霉属、木霉属、酵母属、毕赤酵母属、假丝酵母属，和优选是构巢曲霉。

12.萜烯生物合成基因簇，包含推定地编码以下的基因：

(a)Zn(II)2Cys6-型转录因子(AN1599)、操作性连接AN1594调节区的单萜合酶、HMG-CoA还原酶(AN1593)、GGPP-合酶(AN1592)和

(b)任选翻译延伸因子1-γ(AN1595)、细胞色素P450(AN1598)、短链脱氢酶(AN1596)、与甲基转移酶具有一些相似性的推定蛋白(AN1597)、与所述基因操作性连接的调节区和任选AAA家族ATP酶(AN1591)和

(c)与条目(a)的基因和与条目(b)的基因操作性连接的调节区。

13.萜烯生物合成基因簇，包含推定地编码以下的基因：

(a)Zn(II)2Cys6-型转录因子(AN1599)、操作性连接AN1594调节区的单萜合酶、HMG-CoA还原酶(AN1593)、操作性连接AN1592调节区的GPP-合酶和

(b)任选翻译延伸因子1-γ(AN1595)、细胞色素P450(AN1598)、短链脱氢酶(AN1596)、与甲基转移酶具有一些相似性的推定蛋白(AN1597)、与所述基因操作性连接的调节区和任选AAA家族ATP酶(AN1591)和

(c)与条目(a)的基因和与条目(b)的基因操作性连接的调节区。

14.萜烯生物合成基因簇，包含推定地编码以下的基因：

(a)Zn(II)2Cys6-型转录因子(AN1599)、操作性连接AN1594调节区的倍半萜合酶、HMG-CoA还原酶(AN1593)、GGPP-合酶(AN1592)和

(b)任选翻译延伸因子1-γ(AN1595)、细胞色素P450(AN1598)、短链脱氢酶(AN1596)、与甲基转移酶具有一些相似性的推定蛋白(AN1597)、与所述基因操作性连接的调节区和任选AAA家族ATP酶(AN1591)和

(c)与条目(a)的基因和与条目(b)的基因操作性连接的调节区。