[发明专利]检测产生OXA-048碳青霉烯酶的细菌的方法

说明书

本发明涉及一种检测和/或特异性鉴别生物学样品中产生OXA‑048型碳青霉烯酶的细菌的方法，所述方法包括如下步骤：a)将可能含有所述细菌的生物学样品与反应培养基接触，所述培养基包含用于检测酶活性的至少一种生色底物及浓度等于或大于150mg/L的替莫西林，优选浓度为200‑500mg/L，b)将所述样品在培养基中保温以使得细菌生长，及c)检测相应于产生OXA‑48碳青霉烯酶的细菌的菌株。本发明还涉及步骤a)中使用的培养基。

本发明涉及微生物学分析领域。更具体地，本发明涉及检测和/或鉴别产生OXA-48碳青霉烯酶的细菌的方法。

β-内酰胺抗生素类型如青霉素和头孢菌素类药物的抗生素抗性增加使得治疗由革兰氏阴性菌株导致的感染变得复杂。这些抗生素因此被其它广谱抗微生物制剂代替。碳青霉烯在这些广谱抗微生物制剂中发挥重要作用，特别是在治疗住院患者中。碳青霉烯对于大多数革兰氏阳性和革兰氏阴性需氧菌及对于某些厌氧菌起作用。

然而，在住院患者中出现增加数目的碳青霉烯抗性菌株。此外，需要快速检测呈现出碳青霉烯酶活性的菌株，以在适当情况中进行抗生素治疗，使得可以适当地治疗感染，并用以鉴别携带者以降低这些菌株在护理中心增殖的危险。

β-内酰胺酶是导致β-内酰胺抗生素抗性的细菌性酶，其命名不完全是标准化的。其基于其一级原始结构可以分为四种分子类别(A-D)(Ambler分类)，或者基于靶向的底物及其对抑制剂的抗性按功能分组(参见Bush and Jacoby,Antimicrobial Agents andChemotherapy,2010；54(3):969-976)。

碳青霉烯抗性细菌非限制性地是：大肠杆菌(Escherichia coli)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、柠檬酸杆菌(Citrobacter sp.)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)、臭鼻克雷伯菌(Klebsiellaoxytoca)、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)、雷氏普罗威登斯菌(Providenciarettgeri)、恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)、嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)、鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumanii)、丛毛单胞菌(Comamonas sp.)、产气单胞菌(Aeromonas sp.)、摩氏摩根菌(Morganella morganii)、肠球菌(Enterococcussp.)、奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)、森夫顿堡沙门氏菌(Salmonellasenftenberg)、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)、鼠伤寒沙门氏杆菌(Salmonellatyphimurium)等。

这些细菌可产生能水解碳青霉烯的各种类型的β-内酰胺酶或者碳青霉烯酶。碳青霉烯酶是非常广谱的β-内酰胺酶，能失活几乎所有β-内酰胺抗生素。根据Ambler分类法将其概括地分为三个类别：

A类，也称作丝氨酸碳青霉烯酶，特征在于通过克拉维酸及硼酸的衍生物的可变抑制。主要的代表物是KPC酶；

B类，也称作金属-碳青霉烯酶，特征在于通过阳离子螯合剂如EDTA的抑制。主要的代表物是NDM、VIM和IMP酶；

D类，其相应于OXA-型β-内酰胺酶，其中是变体OXA-48，其具有拥有碳青霉烯酶活性的特性。尽管不是常见的，但是存在通过点突变从OXA-48中衍生的其它变体，其保留这种碳青霉烯酶活性。可以提及的是OXA-162、OXA-163、OXA-181、OXA-204和OXA-232。

金属-β-内酰胺酶(MBL)和肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)在肠杆菌中是普遍存在的，更特别是在北美洲、南美洲、以色列、意大利、希腊、印度、中国和巴基斯坦。苯唑西林酶-48(Oxacillinase-48，OXA-48)最近在土耳其、地中海盆地和在西欧已经分离。