[发明专利]基于适体的多重测定

权利要求书

1.一种方法，其包括：

将对靶分子具有特异性结合亲和力且携带对第一捕获元件具有亲和力的第一标签的适体暴露于包含第一捕获元件的第一固体支持物，并且允许所述第一标签与所述第一捕获元件缔合；

用一种或多种解离聚集的适体的溶液来洗涤所述第一固体支持物；

使所述适体与测试样品接触，其中如果所述测试样品中存在所述靶分子，则形成适体-靶标亲和复合物；

去除混合物中未与所述第一固体支持物缔合的一种或多种组分；

将对第二捕获元件具有亲和力的第二标签连接到所述适体-靶标亲和复合物中的所述靶分子；

从所述第一固体支持物释放所述适体-靶标亲和复合物；

将所述释放的适体-靶标亲和复合物暴露于包含第二捕获元件的第二固体支持物，并且允许所述第二标签与所述第二捕获元件缔合；

去除混合物中未与所述第二固体支持物缔合的任何组分；和

用一种或多种包含破坏适体/分析物相互作用的离液盐的溶液从所述第二固体支持物洗脱适体。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述适体包含至少一种C-5经修饰的核苷酸。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述适体包含至少一种化学修饰，所述化学修饰包括在一个或多个独立地选自核糖位置、脱氧核糖位置、磷酸位置和碱基位置的位置上的化学取代。

4.如权利要求3所述的方法，其中所述化学修饰独立地选自2'-位糖修饰、2'-氨基(2'-NH₂)、2'-氟(2'-F)、2'-O-甲基(2'-OMe)、5-位嘧啶修饰、8-位嘌呤修饰、胞嘧啶环外胺上的修饰、5-溴尿嘧啶的取代、5-溴脱氧尿苷的取代、5-溴脱氧胞苷的取代、主链修饰、甲基化、3'帽和5'帽。

5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其还包括引入动力学挑战。

6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述适体-靶标亲和复合物具有慢解离速率。

7.如权利要求6所述的方法，其中所述适体-靶标亲和复合物的解离速率(t_1/2)大于或等于30分钟。

8.如权利要求7所述的方法，其中所述适体-靶标亲和复合物的解离速率(t_1/2)介于约30分钟与约240分钟之间。

9.如权利要求7所述的方法，其中所述适体-靶标亲和复合物的解离速率(t_1/2)选自≥30分钟、≥60分钟、≥90分钟、≥120分钟、≥150分钟、≥180分钟、≥210分钟和≥240分钟。

10.如权利要求1所述的方法，其中所述一种或多种缓冲溶液中包含有机溶剂。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述有机溶剂是甘油。

12.如权利要求1所述的方法，其中所述离液盐选自高氯酸钠、氯化锂、氯化镁和氯化钠。

13.如权利要求1至12中任一项所述的方法，其中使用选自Q-PCR、MS、下一代测序和杂交的方法检测并且任选地定量所述适体。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述Q-PCR是使用PCR、在PCR方法期间使用插入荧光染料或在PCR方法期间使用分子信标来进行。

15.如权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述适体包含可检测部分。

16.如权利要求15所述的方法，其中所述可检测部分选自染料、量子点、放射性标记物、电化学官能团和酶加可检测酶底物。

17.如权利要求16所述的方法，其中所述染料是荧光染料。

18.如权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述适体是单链核酸或双链核酸。

19.如权利要求18所述的方法，其中所述适体包含DNA、RNA或DNA与RNA两者。

20.如权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述靶分子选自蛋白质、肽、碳水化合物、多糖、糖蛋白、激素、受体、抗原、抗体、病毒、底物、代谢物、过渡态类似物、辅因子、抑制剂、药物、染料、营养物、生长因子、组织和受控物质。