[发明专利]人乳头瘤病毒病毒样颗粒的高效提纯方法

权利要求书

1.一种提纯人乳头瘤病毒（HPV）L1蛋白的方法，包含：

（i）培养表达HPV L1蛋白的转化的宿主细胞，收获所培养的宿主细胞并破碎所述细胞；

（ii）将还原剂添加至宿主细胞的匀浆；

（iii）将上述添加还原剂的宿主细胞的匀浆在25至80℃下加热10分钟至72小时后在0至10℃下冷却30分钟至3小时；和

（iv）通过对加热和冷却的宿主细胞的匀浆执行第一层析来提纯HPV L1蛋白；

（v）对第一层析的洗脱部分执行第二层析来清除污染物质；和

（vi）将上述清除了污染物质的HPV L1蛋白质以病毒样颗粒的形态回收。

2. 根据权利要求1所述的方法，其中HPV选自由HPV6a型、HPV 6b型、HPV 11型、HPV 16型、HPV 18型、HPV 30型、HPV 31型、HPV 33型、HPV 35型、HPV 39型、HPV 41型、HPV 42型、HPV 43型、HPV 44型、HPV 45型、HPV 51型、HPV 52型、HPV 54型、HPV 55型、HPV 56型、HPV58型、HPV 68型和HPV 70型构成的组。

3.根据权利要求1所述的方法，其中宿主细胞为细菌、酵母细胞、昆虫细胞、植物细胞或动物细胞。

4.根据权利要求3所述的方法，其中酵母细胞为酿酒酵母、毕赤酵母或多形汉逊酵母。

5. 根据权利要求1所述的方法，其中还原剂选自由β-巯基乙醇、二硫苏糖醇(DTT)、2-巯基乙胺-HCl、 三(2-羧乙基)磷化氢(TCEP)或半胱氨酸-HCl构成的组。

6.根据权利要求1所述的方法，其中还原剂为β-巯基乙醇或二硫苏糖醇。

7.根据权利要求6所述的方法，其中β-巯基乙醇被添加至宿主细胞的匀浆至具有0.1wt%或更高的最终浓度。

8.根据权利要求6所述的方法，其中二硫苏糖醇被添加至宿主细胞的匀浆至具有2mM或更高的最终浓度。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述层析为离子交换层析、肝素层析或亲和层析。