[发明专利]生物分子检测方法有效

专利信息
申请号: 201380041216.6 申请日: 2013-06-28
公开(公告)号: CN104541160B 公开(公告)日: 2017-05-17
发明(设计)人: 斋藤俊郎;今井健太;今井恭子;今井一成;柳至;柳川善光;安藤正彦;板桥直志 申请(专利权)人: 株式会社日立高新技术
主分类号: G01N27/02 分类号: G01N27/02;G01N27/00;G01N33/543;G01N37/00
代理公司: 北京银龙知识产权代理有限公司11243 代理人: 曾贤伟,曹鑫
地址: 日本*** 国省代码: 暂无信息
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摘要:
搜索关键词: 生物 分子 检测 方法 装置 以及 分析 设备
【说明书】:

技术领域

本发明涉及使用了电流测量的生物分子检测方法以及装置。

背景技术

对血浆、淋巴液、组织液等体液中包含的细胞因子、荷尔蒙、蛋白质、核算等生物分子的量进行定量,或者检测体液中含有的微量生物分子,是疾病的早期诊断或者病症的准确掌握所必不可少的。

癌(非专利文献1)、神经系统的疾病(非专利文献2)、感染症的感染初期时(非专利文献3)的情况中,认为在血清中存在的蛋白质的浓度为从10-16到10-12M。在生物分子的定量或者检测中,通常主要进行使用ELISA法、化学发光法或者流式细胞仪的微球分析等,但是,即使检测灵敏度低,也为10-12M左右(非专利文献4),对疾病早期诊断的应用非常受限制。

例如,假定通常的血液检查,设被检验者的血清试样为50ul左右时,在10-17M(10aM)的标记的情况下仅存在约300个分子,与测量浓度相比更需要计数分子数量的技术,但这样的技术现在没有实用化,期待具有aM数量级的检测灵敏度的检测技术被实用化。

专利文献1中公开一种使用流式细胞仪来求取捕捉了抗原的微粒子的数量的方法。

另外,近些年,提出对100ul中只存在10-20个分子的试样(浓度换算为10-19M)也能够使用抗原-抗体反应来检测的数字ELISA(digital ELISA)方法(非专利文献5)。该方法通过固定了抗体的磁微粒子捕捉抗原(检测对象的生物分子)后,使之与附有生物素的第二抗体反应,进而与附有抗生蛋白链菌素的半乳糖酶反应,向磁微粒子上导入酶。接着,将该微粒子放入将光纤束末端蚀刻而列阵状设置了微小的孔的结构中,使化学发光基质与其作用,由此求取通过光纤的其化学发光亮点数,计数抗原的分子数量。

现有技术文献

专利文献

专利文献1:日本专利第4748542号

非专利文献

非专利文献1:Srinivas,P.R.,Kramer,B.S.&Srivastava,S.Trends in biomarker research for cancer detection.Lancet Oncol.2,698-704(2001).

非专利文献2:Galasko,D.Biomarkers for Alzheimer’s disease–clinical needs and application.J.Alzheimers Dis.8,339-346(2005).

非专利文献3:Barletta,J.M.,Edelman,D.C&Constantine,N.T.Lowering the detection limits of HIV-1viral load using real-time immuno-PCR for HIV-1p24antigen.Am.J.Clin.Pathol.122,20-27(2004).

非专利文献4:Giljohann,D.A.&Mirkin,C.A.Drivers of biodiagnostic development.Nature 462,461-464(2009).

非专利文献5:David M Rissin et al,Nature Biotechnology,28,1641(2010).

非专利文献6:Fologea D.et al.,Appl Phys Lett.,91,053901-3(2007).

非专利文献7:Romero-Cano,M.S.et al.,Journal of Colloid and Interface Science,198,266-272(1998).

发明内容

发明要解决的课题

专利文献1公开的方法中,若考虑光学系统则并行化并不现实,测量可能需要时间。另外,非专利文献5公开的方法中,虽然在某种程度上可以并行处理,但是通过一次检测可检测的分子数受到光纤数量,即阵列状的微小孔数限制。因此,存在当试样浓度低时需要浓缩,相反,当浓度高时需要稀释等,需要检测前的浓度调整这样的在实际应用中处理变得复杂的问题。

鉴于上述课题而作出本发明,提供一种对检测对象的生物分子逐一计数的方法,特别提供一种无需事先调整试样浓度,作业简便的检测方法。

用于解决课题的手段

经本发明的发明人悉心研究,开发出对检测对象的生物分子逐一进行分子计数的方法,且其计数的分子数量没有限制的方法。

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