[发明专利]分离不同胰腺细胞类型的方法

权利要求书

1.一种从异质细胞群体中分离胰腺细胞的至少一种不同类型的富集群体的方法，所述方法包括利用与要分离的细胞类型相关的至少两种细胞表面标志物的组合来分选细胞，其中所述细胞的至少一种不同类型选自由以下组成的组：β细胞和δ细胞，并且其中一种细胞表面标志物为CD9。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述异质细胞群体选自由从胰腺组织回收或提取的细胞、干细胞的定向谱系和分化的干细胞的培养物组成的组。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞表面标志物CD9(NP_00176.1)被用于阳性选择。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞表面标志物CD9为用于分离的第一标志物。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞分离是为得到表达高水平CD9的细胞的富集群体。

6.根据权利要求1所述的方法，所述方法包括以下步骤：

i.获取选自由从胰腺组织回收或提取的细胞、干细胞的定向谱系和分化的干细胞的培养物组成的组的异质细胞群体；

ⅱ.将在(i)中获取的细胞暴露于能鉴定CD9+细胞的探针及至少一种另外的探针；

ⅲ.通过细胞的分选来分离表达CD9和所述另外的探针的细胞，从而分离选自由β细胞和δ细胞组成的组的至少一种不同细胞类型的富集群体。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述细胞利用CD9和选自由以下组成的组的至少一种细胞表面标志物的组合分离：CD56、EGFR、CD4、CD73、CD87、CCR4、CD165、CD85J、CD221、CD153(CD30L)、CD142、CD134、ITGB7、CD68、WNT16、CD18、CD6、CD77、CD61和CD32。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少两种细胞表面标志物为CD9和CD56并且两种标志物均被用于阳性选择。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述至少两种细胞表面标志物为CD9和EGFR，其中CD9被用于阳性选择并且EGFR被用于阴性选择。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其中所述细胞利用至少一种另外的细胞表面标志物分离。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述至少一种另外的细胞表面标志物选自由以下组成的组：CD4(NP_000607.1)、CD73(NP_001191742.1、CD87(NP_002650.1)、CCR4(NP_005499.1)、CD165(Gene ID 23449)、CD85J(NP_001075106.1)、CD221(NP_000866.1)、CD153(CD30L)(NP_001235.1)、CD142(NP_001171567.1)、CD134(NP_003318.1)、ITGB7(NP_000880.1)、CD68(NP_001035148.1)、WNT16(NP_057171.2)、CD18(NP_000202.2)、CD6(NP_001241679.1)、CD77(NP_059132.1)、CD61(NP_000203.2)及CD32(NP_001002273.1)。

12.根据权利要求1所述的方法，其中分离的β细胞为成熟、功能性生成胰岛素的细胞。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述细胞从人类朗格汉斯岛分离。

14.根据权利要求1所述的方法，其中定向细胞谱系从源自成体干细胞、诱导的多能干细胞或胚胎多能干细胞的培养物中分离。

15.根据权利要求6所述的方法，其中(iii)的富集细胞经受步骤(ii)-(iii)的额外重复。

16.根据权利要求6所述的方法，其中(iii)的细胞的分选为荧光激活细胞分选术(FACS)。

17.一种β细胞或δ细胞的群体，其根据权利要求1的方法分离。

18.根据权利要求17所述的β细胞的群体，其中所述细胞为人类细胞。

19.根据权利要求18所述的人类β细胞的群体，所述人类β细胞的群体用于移植到人类受试者以用于糖尿病的预防或治疗。