[发明专利]用于治疗、预防或缓解疼痛的融合蛋白和方法

权利要求书

1.一种单链、多肽融合蛋白，其包含：

a.非细胞毒性蛋白酶，所述蛋白酶切割伤害性感觉传入神经的胞吐融合器的蛋白；

b.结合所述伤害性感觉传入神经上结合位点的甘丙肽靶向部分，所述结合位点胞吞整合入所述伤害性感觉传入神经内的内体；

c.蛋白酶切割位点，所述融合蛋白在所述位点处被蛋白酶切割，所述蛋白酶切割位点位于所述非细胞毒性蛋白酶和所述甘丙肽靶向部分之间；

d.易位结构域，所述易位结构域将所述蛋白酶从所述内体内跨内体膜易位至所述伤害性感觉传入神经的细胞溶质中，其中所述靶向部分位于所述蛋白酶切割位点和所述易位结构域之间；

e.位于所述非细胞毒性蛋白酶和所述蛋白酶切割位点之间的第一间隔子，所述第一间隔子包含4至25氨基酸残基的氨基酸序列；

f.位于所述甘丙肽靶向部分和所述易位结构域之间的第二间隔子，所述第二间隔子包含4至35个氨基酸残基的氨基酸序列。

2.如权利要求1所述的融合蛋白，所述第一间隔子包含6至16个氨基酸残基的氨基酸序列。

3.如权利要求1或2所述的融合蛋白，所述第一间隔子的所述氨基酸残基选自甘氨酸、苏氨酸、精氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、脯氨酸、谷氨酸和/或赖氨酸。

4.如权利要求1-3中任一项所述的融合蛋白，所述第一间隔子的所述氨基酸残基选自甘氨酸、丝氨酸和丙氨酸。

5.如权利要求1-4中任一项所述的融合蛋白，所述第一间隔子选自GS5、GS10、GS15、GS18或GS20间隔子。

6.如权利要求1-5中任一项所述的融合蛋白，所述甘丙肽靶向部分特异性结合GALR1、GALR2和/或GALR3受体。

7.如权利要求1-6中任一项所述的融合蛋白，所述甘丙肽靶向部分包含或由与SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8具有至少70％序列相同性的氨基酸序列组成。

8.如权利要求1-7中任一项所述的融合蛋白，所述甘丙肽靶向部分包含：SEQ ID NO.7的氨基酸序列或其片段，所述片段包含或由至少14或16个毗连氨基酸残基组成；或者包含具有最多5或6个保守性氨基酸取代的所述SEQ ID NO:7或所述片段的变体氨基酸序列。

9.如权利要求1-8中任一项所述的融合蛋白，所述非细胞毒性蛋白酶是梭菌神经毒素L链或IgA蛋白酶。

10.如权利要求1-9中任一项所述的融合蛋白，所述易位结构域是梭菌神经毒素的H_N结构域。

11.如权利要求1-10中任一项所述的融合蛋白，所述融合蛋白包含与选自SEQ ID NO:10、11、13、14、16、17、19、20、22、23、25、26、28、29、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、53、56和/或59的氨基酸序列具有至少90％序列相同性的氨基酸序列。

12.编码权利要求1-11中任一项所述多肽融合蛋白的多核苷酸分子。

13.一种表达载体，其包含启动子、权利要求12所述的多核苷酸分子以及位于所述多核苷酸分子下游的终止子，其中所述多核苷酸分子位于所述启动子的下游。

14.一种制备单链多肽融合蛋白的方法，所述方法包括：

a.使用权利要求13所述的表达载体转染宿主细胞，以及

b.在促进所述表达载体表达所述多肽融合蛋白的条件下培养所述宿主细胞。

15.一种制备非细胞毒性试剂的方法，所述方法包括：

a.使权利要求1-11中任一项所述的单链多肽融合蛋白接触能够切割蛋白酶切割位点的蛋白酶；

b.切割所述蛋白酶切割位点，从而形成双链融合蛋白。