[发明专利]作为抗纤维蛋白溶解剂的纤维蛋白溶酶原活化剂的突变体

说明书

本发明涉及抗纤维蛋白溶解组合物，包括携带取代tPA上的Ser为Ala的至少一个点突变的至少一种tPA突变体，所述突变体抑制tPA和uPA的至少一个的纤维蛋白溶解活性，所以可用于治疗与纤维蛋白溶解过程相关的紊乱，具体地凝血病、血小板减少症和出血。本发明还提供了方法以及本发明的突变体的应用。

发明领域

本发明涉及治疗具有提高的出血倾向的状况。更具体地，本发明涉及用在治疗纤维蛋白溶解相关紊乱的抑制tPA和uPA的纤维蛋白溶解活性的纤维蛋白溶酶原活化剂突变体及其抗纤维蛋白溶解组合物。

发明背景

本文中通过作者以及另外地通过专利申请号/专利号引用各种出版物。这些出版物、专利和专利申请的公开内容通过引用特此全文并入。

损伤(injury)是全世界死亡的主要原因。交通事故每年引起超过百万例死亡，是全球排第九的死亡原因，并预期在2020年前变成排第三的导致死亡和残疾的原因。此外，每年约160万的人死于人际、集体或自主的暴力的故意行为。超过90％的外伤(trauma)死亡出现在相对贫穷的国家。促进医院死亡的另外的因素为出血，认为是约三分之一的住院外伤死亡的原因，并构成由于多器官衰竭的死亡的影响因素。

止血系统有助于保持严重的血管损伤后的循环，无论是源自外伤或外科手术。大的外科手术和外伤引起相似的止血反应，并且在两种情况下，严重的失血呈现对凝血系统的极端挑战。对外科手术及外伤的非期望的响应的一部分为刺激凝块的分解(纤维蛋白溶解)，其在一些情况下变得有害(高纤维蛋白溶解)。

抗纤维蛋白溶解剂减小了具有对外科手术的正常和扩大的纤维蛋白溶解反应的患者中的失血，没有明显的增加手术后并发症的风险。

氨甲环酸为氨基酸赖氨酸的合成的衍生物，通过封闭纤维蛋白溶酶原上赖氨酸的结合位点而抑制纤维蛋白溶解。经选择性外科手术的患者中氨甲环酸的随机实验的系统回顾鉴定了包括3836名参与者的53个研究。氨甲环酸减小了对输血需要的三分之一(Ker K等，BMC Emerg Med.,2012,12:3)。

早期给药短期的氨甲环酸在具有显著的出血或具有这样的事件的风险的外伤患者中减小死亡、血管闭塞的事件以及输血频率(Ker K.同上)。

哺乳动物中的纤维蛋白溶解级联包括两种主要的组分，酶原纤维蛋白溶酶原和两个纤维蛋白溶酶原活化剂组织类型纤维蛋白溶酶原活化剂(tPA)和尿激酶纤维蛋白溶酶原活化剂(uPA)。内源纤维蛋白溶解以纤维蛋白溶酶原结合到血栓的主要组分纤维蛋白开始，然后被tPA或uPA活化成蛋白水解活性酶纤维蛋白溶酶。新产生的纤维蛋白溶酶裂解纤维蛋白凝块成通常被肝脏吸收的可溶的纤维蛋白降解产物(SFDP)。

tPA为由5个结构域组成的类胰蛋白酶的丝氨酸蛋白酶：纤连蛋白指结构域(finger domain)(F)、表皮生长因子结构域(EGF)、两个kringle结构域(K1和K2)和蛋白酶结构域(P)。除了结合到它的底物纤维蛋白溶酶原，tPA还结合纤维蛋白。tPA结合纤维蛋白主要由它的指结构域介导，并且K1的一些参与还介导其从循环快速清除(Stewart R等，JBiol Chem.(2000),275:10112–10120)。