[发明专利]用于转化猪肺炎支原体的载体，转化的猪肺炎支原体菌株及其用途

权利要求书

1.用于制备猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)突变株的方法，其特征在于，所述方法包括通过使用包含至少一个外源DNA序列的携载载体转化猪肺炎支原体菌株的步骤，所述外源DNA序列处于猪肺炎支原体的启动子区的DNA序列的控制下，

其中所述猪肺炎支原体的启动子区与位于编码猪肺炎支原体蛋白的基因的5'侧的包含50个碱基对至300个碱基对的DNA片段对应，所述猪肺炎支原体蛋白选自P36, P46, P65,P76, P97, P102, P146和P216蛋白，

其中所述猪肺炎支原体的启动子区起始或促进猪肺炎支原体DNA序列的转录，

并且其中至少一个外源DNA序列选自：针对抗生素的抗性基因、编码重组酶的基因、编码转座酶的基因、转座酶靶序列、来自猪肺炎支原体的DNA片段、编码诱导针对疾病或病理状况的治疗性或保护性应答的微生物的抗原组分的基因；

其中所述携载载体是复制型质粒载体，其包含：

1)包含支原体菌株的oriC区的DNA序列，所述支原体为猪肺炎支原体，和

2)外源DNA序列，其包含处于猪肺炎支原体启动子区的DNA序列的控制下的标记基因和另外的外源DNA序列；或者

其中所述携载载体是转座子载体，其包含：

1)编码转座酶的DNA序列，和

2)包含标记基因的外源DNA序列，以及

3)另外的外源DNA序列，

其中所述编码转座酶的DNA序列和至少一个所述外源DNA序列处于猪肺炎支原体启动子区的DNA序列的控制下；

其中所述外源DNA序列被稳定地引入猪肺炎支原体菌株的细胞质或基因组中。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述外源DNA序列是针对抗生素的抗性基因，所述抗性基因与编码引起猪疾病的微生物的抗原组分的基因组合。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述与编码引起猪疾病的微生物的抗原组分的基因组合的针对抗生素的抗性基因进一步与编码猪肺炎支原体膜蛋白的基因组合。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述转座子载体是质粒。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述载体包含另外的外源DNA序列，所述另外的外源DNA序列编码诱导针对由以下微生物引起的感染猪的疾病或病理状况的保护性应答的重组蛋白质：放线杆菌属（Actinobacillus sp.）、短螺菌属（Brachyspirasp.）、多杀巴斯德菌（Pasteurella multocida）、沙门氏菌属（Salmonella sp.）、链球菌属（Streptococcus sp.）、等孢子球虫菌属（Isospora sp.）、猪红斑丹毒丝菌（Erysipelothrix rhusiopathiae）、钩端螺旋体属（Leptospira sp.）、葡萄球菌属（Staphylococcus sp.)、副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis）、支气管炎博德特菌（Bordetella bronchiseptica）、梭菌属（Clostridium sp.）、支原体（Mycoplasma sp.）、胞内劳森菌（Lawsonia intracellularis）、大肠杆菌、猪生殖与呼吸综合征病毒、流感病毒、接触性胃肠炎病毒、猪细小病毒、脑心肌炎病毒、冠状病毒、轮状病毒、猪断奶前后发育停滞综合征病原、典型猪瘟病毒、非洲猪瘟病毒、杯状病毒、细环病毒（TTV）和猪环状病毒。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述另外的外源DNA序列选自：编码2型猪环状病毒（PCV2）衣壳蛋白的DNA序列，以及编码包含2型猪环状病毒（PCV2）衣壳蛋白并在所述蛋白质的N末端额外携带MetSerGlySer氨基酸的蛋白质的DNA序列。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，编码所述PCV2衣壳蛋白的所述另外的外源DNA序列选自：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5。