[发明专利]用于美登醇酰化的改进的方法

说明书

相关申请的引用

本申请根据美国法典第35篇第119条(e)款要求2012年9月26日提交的美国临时申请No.61/705,731的申请日的权益，该临时申请的全部内容以引用方式并入本文中。

发明领域

本发明是一种用于制备类美登素及其抗体偶联物的合成中的中间体的改进的方法。

发明背景

类美登素是高度细胞毒性化合物，包括美登醇和美登醇的C-3酯(美国专利No.4,151,042)，如下所示：

天然存在的和合成的美登醇的C-3酯可分为两类：(a)美登素(2)及其类似物(例如，DM1和DM4)，其为与N-甲基-L-丙氨酸或N-甲基-L-丙氨酸的衍生物的C-3酯(美国专利No.4,137,230；4,260,608；5,208,020；和Chem.Pharm.Bull.12:3441(1984))；(b)安丝菌素，其为与简单羧酸的C-3酯(美国专利No.4,248,870；4,265,814；4,308,268；4,308,269；4,309,428；4,317,821；4,322,348；和4,331,598)。

美登素(2)、其类似物以及安丝菌素物种中的每一种为可通过酯化美登醇而得到的美登醇(1)的C3酯。美国专利No.7,301,019和7,598,375描述了在碱的存在下用氨基酸的N-羧基酸酐(NCA,5)酰化美登醇(1)以形成美登醇的氨基酸酯(May-AA,6)的方法，如下所示：

美登醇的氨基酸酯是可与羧酸偶联以提供类美登素的有价值的中间体。例如，美登醇与(4S)-3,4-二甲基-2,5-噁唑烷二酮(5a)反应形成N2’-去乙酰基-美登素(6a)，其又可利用N-(3-二甲基氨丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDAC)与3-(甲基二硫代)丙酸(7)偶联，从而形成DM1-SMe(8)，如下所示：

形成美登醇的氨基酸酯的酰化反应的显著缺点是，其也形成在C3侧链中包含额外N-甲基-丙氨酰部分的副产物，所述部分被称为“额外-NMA”(9)。当N2’-去乙酰基-美登素被酰化时，额外NMA(9)也被酰化形成额外NMA-DM1-SMe(9a)。额外-NMA(9)和额外-NMA-DM1-SMe(9a)的结构在下面示出：

DM1(3)可通过还原由DM1-SMe(8)制备，其还将任何额外-NMA-DM1-SMe(9a)转化成额外-NMA-DM1(10)，如下所示：

额外-NMA-DM1(10)难以从DM1(3)中去除，因为，因为两种化合物具有相似的极性并且在纯化DM1(3)的HPLC迹线中具有重叠峰。DM1(3)和DM4(4)用于制备抗体偶联物，其中若干种已在进行临床试验。

因此，需要提高用于制备这些类美登素的方法的收率和稳健性并且将这些类美登素制备中所用反应期间形成的副产物减至最少。

发明概述

现已发现，向美登醇与氨基酸的N-羧基酸酐之间的反应中添加干燥剂会显著增加美登醇的氨基酸酯的收率，如实施例1-4中所示。还已发现，在美登醇与氨基酸的N-羧基酸酐反应之后加入使用亲核试剂的预淬灭步骤会显著减少不需要的副产物(诸如额外-NMA)的形成，如实施例6-8中所示。基于这些发现，本文中公开了制备美登醇的氨基酸酯的改进的方法。

本发明的第一实施方案是一种制备由式(I)表示的美登醇的氨基酸酯的方法：

其中R₁为氢、任选取代的C1-C10烷基或氨基酸侧链，条件是，如果氨基酸侧链具有官能团，则所述官能团被任选地保护；并且R₂为氢或任选取代的C1-C10烷基。

所述方法包括使美登醇与N-羧基酸酐在另外包含碱和干燥剂的反应混合物中反应。N-羧基酸酐由下式表示：

式(II)中的所有变量均如式(I)中所定义。

本发明的第二实施方案为一种制备由式(I)表示的美登醇的氨基酸酯的方法，其包括：a)使美登醇与由式(II)表示的N-羧基酸酐在另外包含碱的反应混合物中反应；和b)使来自步骤a)的未反应的N-羧基酸酐与亲核试剂反应。式(I)和(II)中的所有变量均如本发明的第一实施方案中所定义。

附图简述

图1-2为示出用羧酸和缩合剂酰化N2’-去乙酰基-美登素的示意图。