[发明专利]经修饰的宿主细胞的建立方法

权利要求书

1.建立可使2种以上的外来基因稳定地表达的用于重组蛋白质生产的哺乳动物细胞株的方法，其包括：向哺乳动物细胞导入抑制NfkBia的表达的非编码RNA的基因，使该非编码RNA表达，

其中2种以上的外来基因是编码两个以上同时稳定地表达困难的蛋白质的基因，且

其中抑制NfkBia的表达的非编码RNA的基因是由选自下述序列组成的DNA：SEQ ID NO：2，3，5和6之任一个所示的核苷酸序列。

2.权利要求1的方法，其中所述外来基因编码两种以上蛋白质，所述蛋白质选自两种以上同时稳定地表达困难的蛋白质的下述组合：

(1)两种以上转运子；

(2)两种以上对转运子功能必要的辅助蛋白质；

(3)两种以上酶蛋白质；

(4)两种以上转运子与1种或两种以上酶蛋白质；

(5)1种或两种以上转运子与两种以上酶蛋白质；

(6)1种转运子和1种酶蛋白质。

3.权利要求2的方法，其中所述非编码RNA由选自下述序列的DNA序列编码：SEQ ID NO：2。

4.哺乳动物细胞，其中向所述哺乳动物细胞导入抑制NfkBia的表达的非编码RNA的基因，使该基因表达，并且，使2种以上的外来基因稳定地表达，

其中2种以上的外来基因是编码2种以上同时稳定地表达困难的蛋白质的基因，

和

其中抑制NfkBia表达的非编码RNA的基因是由选自下述序列组成的DNA：SEQ ID NO：2，3，5和6之任一个所示的碱基序列；

和

所述外来基因编码两种以上蛋白质，所述蛋白质选自两种以上同时稳定地表达困难的蛋白质的下述组合：

(1)两种以上转运子；

(2)两种以上对转运子功能必要的辅助蛋白质；

(3)两种以上酶蛋白质；

(4)两种以上转运子与1种或两种以上酶蛋白质；

(5)1种或两种以上转运子与两种以上酶蛋白质；

(6)1种转运子和1种酶蛋白质。

5.权利要求1～3之任一项所述的方法，其中向细胞再导入希望得到的蛋白质的基因。

6.权利要求4所述的细胞，其中向细胞再导入希望得到的蛋白质的基因。

7.权利要求5所述的方法，其中希望得到的蛋白质是抗体。

8.权利要求6所述的细胞，其中希望得到的蛋白质是抗体。

9.权利要求1所述的方法，其包括：

向细胞导入第1外来基因及抑制NfkBia的表达的非编码RNA的基因，其中所述非编码RNA的基因由SEQ ID NO：2的序列组成；及

向细胞导入与第1外来基因同时稳定地表达困难的第2外来基因，

其中

第1和第2外来基因是编码蛋白质的基因，及

建立表达抑制NfkBia的表达的非编码RNA的基因、及编码蛋白质的第1和第2外来基因的重组蛋白质生产用的细胞株。

10.权利要求1所述的方法，其包括：

向细胞导入第1外来基因及抑制NfkBia的表达的非编码RNA的基因，其中非编码RNA的基因由SEQ ID NO：2的序列组成，

向细胞导入第2外来基因，及

向细胞导入与第2外来基因同时稳定地表达困难的第3外来基因，

其中

第1、第2、及第3外来基因是编码蛋白质的基因，及

建立表达抑制NfkBia的表达的非编码RNA的基因、及编码蛋白质的第1、第2、第3外来基因的重组蛋白质生产用的细胞株。

11.权利要求9所述的方法，其中第1和第2外来基因是两种转运子的基因或两种代谢酶的基因。

12.权利要求10所述的方法，其中第2和第3外来基因是两种转运子的基因和两种代谢酶的基因。