[发明专利]具有过氧合酶活性的多肽

说明书

对序列表的引用

本申请包括一个计算机可读形式的序列表，将其通过引用结合在此。

背景

发明领域

本发明涉及具有过氧合酶(peroxygenase)活性的多肽和编码这些多肽的多核苷酸。本发明还涉及核酸构建体、载体以及包括这些多核苷酸的宿主细胞连同产生和使用这些多肽的方法。

相关技术说明

WO 2006/034702 A1披露了使用茶树菇TM A1的AaP过氧合酶来酶促羟基化未活化的烃(例如，萘、甲苯和环己烷)的方法。这也描述于乌尔里克(Ullrich)和霍夫里克特(Hofrichter)，2005，欧洲生化学会联合会快报(FEBS Letters)579：6247-6250中。

DE 103 32 065 A1披露了用于通过使用茶树菇TM A1的AaP过氧合酶通过醛的中间形成从醇中酶法制备酸的方法。

报道了用于通过该AaP过氧合酶而快速和选择性地以分光光度计直接检测芳香族羟基化的方法(克卢格(Kluge)等人，2007，应用微生物学和生物技术(Appl Microbiol Biotechnol)75：1473-1478)。

从嗜粪真菌辐毛鬼伞(Coprinus radians)中分离了另一种能够进行芳香族过氧合化(peroxygenation)的过氧合酶并对其进行了表征，鉴定了N-末端16个氨基酸并与较早公布的茶树菇的AaP酶的N-末端14个氨基酸进行了比对；但是未分离编码基因(安赫(Anh)等人，2007，应用与环境微生物学(Appl Env Microbiol)73(17)：5477-5485)。

WO 2008/119780披露了若干种不同的过氧合酶多肽及其编码多核苷酸连同其重组产生。

WO 2011/120938披露了使用过氧合酶多肽的脂肪烃的位点特异性羟基化。

本发明提供了具有过氧合酶活性的新颖多肽和编码这些多肽的多核苷酸。

发明概述

本发明涉及具有过氧合酶活性的分离的多肽，这些分离的多肽选自下组，该组由以下各项组成：

(a)一种多肽，该多肽与SEQ ID NO:2的成熟多肽具有至少60％的序列一致性；

(b)一种由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸在中严谨度条件下与(i)SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、(ii)其cDNA序列、或(iii)(i)或(ii)的全长互补体杂交；

(c)一种由以下多核苷酸编码的多肽，该多核苷酸与SEQ ID NO:1的成熟多肽编码序列、或其cDNA序列具有至少60％序列一致性；

(d)SEQ ID NO:2的成熟多肽的一种变体，该变体在一个或多个(例如，若干个)位置处包括取代、缺失、和/或插入；以及

(e)(a)、(b)、(c)或(d)的多肽的一个片段，该片段具有过氧合酶活性。

本发明还涉及编码本发明的多肽的分离的多核苷酸；核酸构建体；重组表达载体；包括这些多核苷酸的重组宿主细胞；以及产生这些多肽的方法。

本发明还涉及使用本发明的多肽的方法。

本发明还涉及一种编码信号肽的多核苷酸，该信号肽包括SEQ ID NO:2的氨基酸-16至-1或由其组成，该多核苷酸被可操作地连接至编码一种蛋白质的基因；包括这些多核苷酸的核酸构建体、表达载体和重组宿主细胞；以及产生一种蛋白质的方法。

定义