[发明专利]产生显著均质的聚糖结构的巴斯德毕赤酵母菌株

权利要求书

1.巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)的经工程化的稳定菌株，其包含：

被转录为编码突变型OCH1蛋白的mRNA的突变OCH1等位基因，所述突变型OCH1蛋白包含与野生型OCH1蛋白的催化结构域基本上相同的催化结构域和相较于野生型OCH1蛋白改变突变型OCH1蛋白的高尔基体定位的N-末端序列，其中所述菌株产生基本上均质的N-聚糖。

2.权利要求1的菌株，其中包含催化结构域的所述突变型OCH1蛋白的C-末端片段与SEQ ID NO:2的氨基酸45-404具有至少95％的同一性。

3.权利要求1的菌株，其中所述突变型OCH1蛋白缺乏用于将所述突变型OCH1蛋白靶向至高尔基体的N-末端序列。

4.权利要求3的菌株，其中所述突变型OCH1蛋白在N-末端区上缺乏膜锚定结构域。

5.权利要求1的菌株，其中所述突变型OCH1蛋白中膜锚定结构域的缺乏是OCH1野生型蛋白的N-末端部分的删除的结果，其中被删除的部分包含野生型OCH1蛋白的膜锚定结构域的一个或多个氨基酸。

6.权利要求5的菌株，其中所述删除部分还包含野生型OCH1蛋白的胞质尾区的一个或多个氨基酸。

7.权利要求1的菌株，其中所述突变型OCH1蛋白包含如SEQ ID NO:3所示的序列。

8.权利要求1的菌株，其中所述突变OCH1等位基因存在于染色体上。

9.权利要求8的菌株，其中所述突变OCH1等位基因取代OCH1基因座上的野生型OCH1等位基因。

10.权利要求1的菌株，其中所述突变OCH1等位基因被维持在质粒上，并且其中染色体上的野生型OCH1等位基因已被破坏。

11.权利要求1的菌株，其中所述菌株产生基本上均质的以Man8GlcNAc2为主要的N-聚糖形式的N-聚糖。

12.权利要求1的菌株，其中所述菌株还包含编码和表达α-1,2-甘露糖苷酶或其功能性片段的核酸。

13.权利要求12的菌株，其中所述编码和表达所述α-1,2-甘露糖苷酶或其功能性片段的核酸被整合在所述菌株的OCH1基因座上。

14.权利要求13的菌株，其中所述OCH1基因座包含如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。

15.权利要求12的菌株，其中所述菌株产生基本上均质的以Man5GlcNAc2为主要的N-聚糖形式的N-聚糖。

16.权利要求1或权利要求12的菌株，其还包含编码和表达异源蛋白的核酸。