[发明专利]作为一类新型抗微生物剂的四分枝肽和类似物及其制备

说明书

发明领域

本发明涉及具有抗微生物特性(特别是抗真菌特性)的四聚体形式的肽。本发明还涉及制造这些四聚肽的方法。本发明还涉及这些多聚体用于抑制微生物(特别是真菌)生长的用途。本发明进一步涉及包含这些四聚肽的组合物。

发明背景

抗真菌剂用于抑制真菌生长和/或杀死真菌(杀真菌剂)。例如，抗真菌药物是用于在患者(尤其是免疫系统遭到削弱的患者)中治疗由真菌引起的感染和预防真菌感染发生的药物。在美国，致病性真菌感染是感染相关性死亡中第七常见的原因。实际上，近期的调查提示真菌疾病正对全球生物区构成日益增长的威胁。

与抗细菌药物相比，可用的抗真菌剂的数目有限，因为真菌中的常用药物靶标与人体中的相似分子类型同源，后者可能也受到抑制。抗真菌剂的例子包括多烯、唑、烯丙胺、氟胞嘧啶(fluocytosine)和棘球白素(echniocandin)(图9)。此外，近期的报告表明真菌对现有抗真菌剂的抗性的发生率日益增加。

眼的真菌感染(例如真菌性角膜炎或角膜霉菌病)在热带气候中常见。在发达国家，隐形眼镜或眼镜护理液的使用是真菌性角膜炎的主要风险因素。自从第一次报道隐形眼镜相关真菌性角膜炎，一些国家记录了眼部真菌病原体感染的发病(图10)。对于真菌性角膜炎，那他霉素是仅有的美国FDA批准的眼科抗真菌剂

真菌中抗药性的出现连同免疫受损患者数目的增加已限制临床医师的治疗选项，并凸显了对新类型的抗真菌剂的需要。

因此，需要开发特别适合作为抗真菌剂的抗微生物剂，所述抗真菌剂具有广谱，适于多种用途，尤其是眼部感染的治疗，优选对真菌形成抗性能复原。

发明概述

根据第一方面，本发明涉及一种包含式[(RGRKVVRR)₂K]₂KK_i的分离的肽四聚体或一种具有初始肽单体(RGRKVVRR)的肽四聚体[(RGRKVVRR)₂K]₂KK_i的分离的肽四聚体衍生物；包含至少1处氨基酸替代、至少1处氨基酸删除、至少1个肽单体与初始肽单体相比的重排和/或至少一个肽单体中与初始肽单体相比的至少一处非蛋白质发生性(non-proteogenic)氨基酸修饰；其中i＝0或1。

本发明还涉及此处描述的分离的肽四聚体衍生物或分离的肽四聚体的用途。

本发明还包括制备此处描述的分离的肽衍生物或分离的肽四聚体的方法。

附图简述

图1：单体、线性反向二聚体(retrodimer)、肽二聚体B2088、肽四聚体B4010、乱序B4010(scrambled B4010)和那他霉素的结构。

图2：B4010介导的对白色假丝酵母(C.albicans)(A)ATCC 10231和(B)临床隔离群DF2672R的杀伤的动力学。将2x10⁶个细胞与指定浓度的B4010、两性霉素B和那他霉素一起温育。在指定时间点将样品的小样铺在SDA上，并测定细胞存活力。

图3：B4010在金属离子和复杂生物学流体存在下的抗真菌特性。(A)在单价和二价金属离子存在下测定的MIC值。条上方的数字指示测定的MIC值。(B)B4010在金属离子存在下的杀假丝酵母特性。B4010的浓度为5.5μM。(C)在胰蛋白酶存在下的抗真菌活性(胰蛋白酶:B4010＝1:100)。(D)B4010在50％家兔泪液存在下的杀假丝酵母活性。

图4：B4010的毒性和角膜上皮重形成速率。(A)B4010和多烯抗真菌剂(那他霉素和两性霉素B)对4％家兔红血细胞的溶血毒性。(B)B4010和多烯抗真菌剂对人角膜上皮(HCE)细胞的细胞毒性。(C)B4010对新西兰白色家兔角膜上皮重形成的影响，通过荧光染色测量。肽浓度为22μM。