[发明专利]NADP(H)传感器和醇脱氢酶的研发有效

专利信息
申请号: 201380055705.7 申请日: 2013-08-16
公开(公告)号: CN104781419B 公开(公告)日: 2018-09-11
发明(设计)人: S·斯德勒尔;G·舍恩德兹罗兹;S·宾德;L·埃格林;S·布林格尔-迈耶;M·博特 申请(专利权)人: 于利奇研究中心有限公司
主分类号: C12Q1/6897 分类号: C12Q1/6897
代理公司: 北京市中咨律师事务所 11247 代理人: 胡志君;黄革生
地址: 德国*** 国省代码: 德国;DE
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摘要:
搜索关键词: nadp 传感器 脱氢酶 研发
【说明书】:

发明涉及一种NADP(H)纳米传感器,其包含i)调节物能够与之结合的核酸序列,其中调节物的氧化状态取决于NADP(H)的可用性;ii)RNA聚合酶能够与之结合的接在核酸序列i)之后的启动子序列,其中RNA聚合酶对启动子序列的亲和力受调节物的氧化状态影响;iii)处于启动子序列ii)控制下并编码自发荧光蛋白的核酸序列。本发明也涉及细胞、用于分离编码NADP(H)依赖性酶的基因的方法和NADP(H)纳米传感器的用途。

技术领域

本发明涉及NADP(H)纳米传感器、细胞、用于分离编码NADP(H)依赖性酶的基因的方法和NADP(H)纳米传感器的用途。

背景技术

许多例子中公开了NADP(H)依赖性酶在化学工业中作为催化剂的用途。因此,醇脱氢酶,也称作氧化还原酶或酮还原酶,用于还原羰基。特别地,对映特异性和区域特异性用于还原前手性酮类。用于有用化学化合物合成的这类酮还原酶的例子是非对称还原4-氯乙酰乙酸酯(US 5,559,030,US 5,700,670和US 5,891,685),还原二羧酸类(US 6,399,339)、还原叔丁基-(S)-氯-5-羟-3-氧代己酸酯(US 6,645,746和WO-A-01/40450)、还原基于吡咯并三嗪的化合物(US-A-2006/0286646),还原取代的苯乙酮(US 6,800,477,US-A-2012/0178142)或还原羟硫杂环戊烷类(WO-A-2005/054491)。α-卤代酮同样酶促还原成α-卤代醇。这也可以通过分离的酶或用完整细胞实施(WO-A-2008/038050)。借助来自短乳杆菌(Lactobacillus brevis)或布氏热厌氧菌(Thermoanaerobium brokii)的特定醇脱氢酶,实现8-氯-6-氧代辛酸烷基酯还原为(R)-或(S)-8-氯-6-羟辛酸烷基酯,其分别用作(R)-α-硫辛酸和(S)-α-硫辛酸的前体(US 7,157,253)。还描述了制备光学活性烷醇的方法,其中通过酶促还原相应酮类实施例如(1S)-3-甲氨基-1-(2-噻吩基)-丙-1-醇和(1S)-3-氯-1-(2-噻吩基)-丙-1-醇的制备(WO-A-2006/094945)。同样已知通过酮还原酶或醇脱氢酶对映特异地制备3-羟丁基3-羟丁酸酯的方法(US-A-2012/0064611)。US 6,645,746公开了来自木兰假丝酵母(Candida magnoliae)的氨基酸序列,所述氨基酸序列可以用于借助NADP(H)将叔丁基-(5S)-6-氯-5-羟-3-氧代己酸酯还原成叔丁基-(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟己酸酯。在这份文献的说明书中,使用优选地与来自巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)的葡萄糖脱氢酶共表达的酶,借助葡萄糖脱氢酶并以葡萄糖作为辅底物实施辅因子NADP(H)的再生。WO-A-2004/111083描述了一种用于对映选择性酶促还原酮类、尤其2-和3-氧代酸酯的方法,其中反应由来自荚膜毕赤酵母(Pichia capsulata)的氧化还原酶催化。WO-A-2005/108593描述了一种用于制备1-丁醇的方法,其中2-丁酮在双相体系中用羰基还原酶(例如来自近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis))和辅酶还原。EP-A-2,061,880公开了一种从α,β-不饱和炔酮衍生物中NADP(H)依赖性酶促制备烯酮衍生物的方法,其中相应的还原酶以纯化形式使用或还以微生物原样形式使用。EP-A-2,087,127描述了一种用于在NADP(H)存在下使用氧化还原酶/脱氢酶,通过对映选择性酶促还原仲二酮(secodione)衍生物而制备仲醇(secol)衍生物的方法。

除NADP(H)-依赖性还原酮类和醛类之外,NADP(H)依赖性酶,即所谓的烯酯还原酶(enoate reductase),还用于对映特异性还原烯酮类。因此,Kataoka和同事已经报道,通过使用来自马其顿假丝酵母(Candida macedoniensis)的烯酯还原酶连同来自大肠杆菌的产生NADP(H)的葡萄糖脱氢酶一起,将酮异佛尔酮制备性还原成(6R)-levodione(Kataoka,Kotaka,Thiwthong,Wada,Nakamori和Shimizu,J.Biotechnol.,2004,114,1–9)。

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