[发明专利]用于产生单糖的方法

权利要求书

1.一种使用微生物生产游离形式的L-岩藻糖的方法，所述方法包括以下步骤：

a)提供基因工程化的微生物，所述微生物具有用于合成所述L-岩藻糖的以下酶活性：i)糖基转移酶，所述糖基转移酶特异性地能够将岩藻糖从GDP-岩藻糖转移到受体-底物以形成受体-岩藻糖-底物，其中，所述糖基转移酶是细菌α-1,2-岩藻糖基转移酶，以及ii)糖苷酶，所述糖苷酶能够从所述受体-底物释放所述L-岩藻糖，其中，所述糖苷酶是1,2-α-L-岩藻糖苷酶；其中所述微生物不能代谢所述L-岩藻糖；其中，所述微生物已被转化以包含以下中的至少一种：i)编码并不天然存在于所述微生物中的所述糖基转移酶的核酸序列，和/或ii)编码并不天然存在于所述微生物中的所述糖苷酶的核酸序列；

b)在适合生长所述微生物的培养基中培养所述微生物，借此产生游离形式的所述L-岩藻糖，

c)从所述培养基回收所述游离的L-岩藻糖。

2.根据权利要求1所述的方法，特征在于，所述受体-底物相对于所述微生物是内源性的或被加入在其中培养所述微生物的所述培养基。

3.根据权利要求1或2所述的方法，特征在于，所述受体-底物选自二糖，单糖，多糖，糖基化蛋白或脂多糖。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述二糖是乳果糖或乳糖。

5.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，特征在于，在包含碳源的培养基中培养所述微生物，所述碳源选自甘油、蔗糖、糖蜜、木糖、纤维素、合成气。

6.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，特征在于，所述方法是分批或连续方法。

7.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，特征在于，从所述培养的微生物的上清回收所述L-岩藻糖，其中通过离心所述培养的宿主微生物以获得上清和微生物沉淀物来获得上清。

8.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，特征在于，在步骤c)中在回收所述L-岩藻糖以前，将β-半乳糖苷酶加入在其中培养所述宿主微生物的培养基中，和/或在所述微生物中诱导β-半乳糖苷酶的内源性生产。

9.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，特征在于，在从所述上清回收所述L-岩藻糖以前，用β-半乳糖苷酶来处理所述上清然后与所述培养的宿主微生物接触。

10.根据权利要求1至2中任一项所述的方法，特征在于，所述方法包括以下步骤：

a)在适合生长微生物的培养基中提供重组宿主微生物，所述重组宿主微生物已被转化以包含a)编码在所述微生物中并不天然存在的所述糖基转移酶的核酸序列，以及b)编码在所述微生物中并不天然存在的所述糖苷酶的核酸序列，其中所述微生物不能代谢待产生的所述L-岩藻糖，

b)将受体-底物加入在其中培养所述宿主微生物的所述培养基，其中所述受体-底物是二糖，

c)在所述培养基中培养所述重组宿主微生物，借此产生游离形式的所述L-岩藻糖，

d)从所述培养基回收所述游离的L-岩藻糖。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，所述二糖是乳果糖或乳糖。

12.一种用于生产游离形式的L-岩藻糖的重组宿主微生物，所述微生物具有以下用于合成L-岩藻糖的酶学活性：(i)特异性地能够将岩藻糖从GDP-岩藻糖转移到受体-底物以形成受体-岩藻糖-底物的糖基转移酶，其中，所述糖基转移酶是细菌α-1,2-岩藻糖基转移酶，和(ii)能够从所述受体-底物释放所述L-岩藻糖的糖苷酶，其中，所述糖苷酶是1,2-α-L-岩藻糖苷酶；其中，所述微生物不能代谢所述单糖，所述微生物已被转化以能够生长于唯一碳源上，所述微生物已被转化以包含编码所述糖基转移酶多肽的核酸序列并且包含编码所述糖苷酶多肽的核酸序列，其中，所述编码所述糖基转移酶多肽的核酸和/或所述编码所述糖苷酶多肽的核酸序列并不天然存在于所述微生物中。