[发明专利]与真核细胞调节剂相关的方法和组合物

说明书

一种用于鉴定真核细胞的蛋白调节剂的方法，其通过在真核细胞内表达潜在激动剂的组合库，然后直接选择靶分子的激动剂来实施。一些方法涉及共同培养表达潜在激动剂的组合库的细胞以及第二细胞，然后选择调节第二细胞的表型或调节在第二细胞中期望的细胞应答反应的剂。优选地，所述激动剂是被引入到初始细胞并在其中表达的抗体，例如激动剂抗‑EpoR、抗‑TpoR或G‑CSFR抗体。本发明还公开了用于从组合抗体库选择能调节细胞表型的双特异性抗体的方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求(于2012年8月31日提交的)美国临时申请号61/695527和(于2013年4月22日提交的)美国临时申请号61/814646的优先权。这些优先权申请的全文为了本文的目的以引用的方式整体并入本文中。

背景技术

功能性抗体是治疗多种疾病的重要治疗方法选择。目前，免疫化学领域将注意力转向更具挑战性的目标，例如产生其中有用分子可以是非常稀有的广谱中和抗病毒抗体。该频繁发生的问题很大程度上由于组合抗体库的出现而得以解决，其中如今人们可以从包含多达1011个不同的成员的组成库中选择。例如，该方法的功效已在流感病毒的研究中得到证实，其中稀有抗体的选择导致新的病毒中和模型的发现，从而为治疗并且甚至通用型疫苗的产生提供了先前未能实现的可能性。

然而，即使对该频繁发生的问题已有了解决方案，针对其功能远超过简单结合的抗体的分离仍是一个艰难的过程。因此在本领域中需要能从候选分子库中鉴别功能性抗体的更好的方法。本发明涉及该需求以及其它需求。

发明内容

在一方面，本发明提供了鉴定调节真核细胞的表型的调节蛋白剂(例如抗体或其它多肽)的方法。该方法要求首先在真核细胞类型的细胞群中表达候选剂(例如抗体或其抗原结合片段)的库。这将产生表达该候选剂的经修饰的异质细胞群体。优选地，在每种细胞表达不超过3种不同的候选剂的库的成员的条件下，将候选剂的库导入到所述起始同质的细胞群体中并被表达。在一些所述优选实施方案中，每种细胞表达仅所述导入的外源性剂中的一种。随后选择至少一种特定的表达剂(agent-expressing)的细胞，其具有与相同真核细胞类型的未修饰的对照细胞相比经修改的表型。这允许将在特定表达剂的细胞中表达的特定候选剂(例如激动剂抗体)鉴定为真核细胞类型的调节剂。

通常，候选剂的库是分泌的多肽或肽(例如分泌的抗体或胞内抗体)的组合库。在一些实施方式中，所述剂的组合库是通过慢病毒载体或逆转录病毒载体在细胞中表达的抗体库。在一些优选实施方式中，在所述方法中采用的细胞类型是哺乳动物细胞类型。在本发明的一些方法中，在选择期间，其调节抗体有待鉴定的细胞被培养在限制扩散介质中。本发明的一些方法进一步包括分离编码所述特定候选抗体的多核苷酸序列，以及测定该经鉴定的候选抗体的核苷酸序列以及重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列。

在一些实施方式中，有待调整或调节的表型是细胞的应答反应或细胞的信号传导活动。在一些实施方式中，所述真核细胞类型是干细胞类型，且所述表型是所述干细胞的分化。在本发明的一些方法中，通过靶分子介导该待调节的表型。在一些实施方式中，由肿瘤抑制基因或致癌基因编码该靶分子。在一些其它实施方式中，该靶分子是分泌的激素或细胞因子，例如促红细胞生成素，血小板生成素或IL-1。在一些实施方式中，所述靶分子是细胞的信号传导受体。例如，其可以是针对分泌的激素或细胞因子的受体。本发明的一些实施方式涉及鉴定表型调节剂，所述表型调节剂是异二聚体双特异性抗体。在一些实施方式中，所述经鉴定的双特异性抗体结合至靶分子上的两种不同的表位。