[发明专利]计算优化的广泛反应性H1N1流感抗原

说明书

交叉引用相关申请

本申请要求2012年11月27日提交的美国临时申请号61/730,186的权益，在此整体引入该申请的内容。

技术领域

本公开涉及优化的流感血凝素蛋白，该流感血凝素蛋白对H1N1病毒分离物引起广泛的反应性免疫应答，以及该流感血凝素蛋白作为疫苗的使用。

背景技术

流感病毒是正粘病毒科的成员。有3个亚型的流感病毒，分别命名为A型流感病毒，B型流感病毒和C型流感病毒。流感病毒的病毒粒子含有分段的负股(negative-sense)的RNA基因组，其编码下列蛋白：血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、基质(M1)、质子离子通道蛋白(M2)、核蛋白(NP)、聚合酶碱性蛋白1(PB1)、聚合酶碱性蛋白2(PB2)、聚合酶酸性蛋白(PA)、非结构蛋白2(NS2)。HA、NA、M1和M2为膜相关蛋白，而NP、PB1、PB2、PA和NS2为核衣壳相关蛋白。在流感病毒粒子中M1蛋白是最丰富的蛋白。HA和NA蛋白为包膜糖蛋白，负责病毒的附着和病毒粒子渗入细胞，并且对于病毒中和和保护性免疫来说是主要的免疫显性表位来源。HA和NA蛋白两者都被认为是预防性流感病毒疫苗的最重要成分。

每年，仅在美国，季节性流感都会导致超过300,000人住院和36,000人死亡(Simonsen等，Lancet Infect Dis 7：658-66，2007)。在2009年，新流感病毒H1N1的出现演示了新的流感大流行能够如何迅速地席卷全球。

目前，在美国有两种许可的流感疫苗方式，分别为灭活的裂解疫苗和减毒活疫苗。灭活疫苗可以有效地诱导体液免疫应答，但通常不能很好地引起细胞免疫应答。因为可能会增加感染的风险，活毒疫苗不能施用于免疫功能低下者和怀孕的病人。因此，存在对更广泛的保护性流感病毒疫苗的需要。

发明概要

本发明公开了优化的H1N1流感HA多肽的产生，该优化的H1N1流感HA多肽用于引发针对H1N1流感病毒分离物的广泛反应性免疫应答。优化的HA多肽是基于选定的来自1918-2012的分离的H1N1病毒，通过一系列的HA蛋白比对(alignments)，以及随后产生共有序列而开发的。

本发明提供了重组流感病毒HA多肽，该重组流感病毒HA多肽具有优化的氨基酸序列，用于对H1N1流感引起广泛的反应性免疫应答。在一些实施方案中，所述HA多肽包含氨基酸序列，所述氨基酸序列与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7相比，至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％是相同的。在一些实施方案中，所述多肽的氨基酸序列相对于SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7，包括不超过5个、不超过6个、不超过7个、不超过8个、不超过9个、或不超过10个的氨基酸置换。在一些实施方案中，HA多肽包含SEQ ID NO：8。在一些实施方案中，流感HA多肽缺少N末端的蛋氨酸残基。

本发明也提供了编码重组HA多肽的分离的核酸分子和载体。进一步提供了包括这样的载体的分离的细胞。

本发明也提供了包括本文所公开的优化的HA多肽的流感病毒样粒子(VLP)和融合蛋白。

本发明进一步提供了组合物，所述组合物包含在药学上可接受的载体中的本发明所公开的优化的流感HA多肽、融合蛋白或VLP。本公开也提供通过对受试对象施用所公开的组合物、融合蛋白或VLP而引起对流感病毒的免疫应答的方法。

本发明也提供了通过对受试对象施用包括VLP的组合物而使受试对象对流感病毒免疫的方法，该VLP含有优化的HA多肽。

通过以下参考附图的详细描述，本发明上述的和其它的目标、特征和优点将变得更加清晰。

附图的简要说明

图1是根据方法X-1的用于生成H1N1 HA共有序列的工艺的原理图。

图2是根据方法X-2的用于生成H1N1 HA共有序列的工艺的原理图。

图3是根据方法X-3的用于生成H1N1 HA共有序列的工艺的原理图。

图4是根据方法X-4的用于生成H1N1 HA共有序列的工艺的原理图。