[发明专利]用于标靶核酸富集的组合物、方法、系统和试剂盒

权利要求书

1.一种用于从引物延伸反应混合物纯化引物延伸产物的方法，其包含：

使引物与模板核酸杂交，其中所述引物包括由不可复制部分间隔开的第一引物序列和第二引物序列，并且其中所述第一和第二引物序列与彼此实质上互补并且具有第一Tm；

使所述引物以模板依赖性方式延伸以形成引物延伸产物，其具有包括所述第一引物序列的单链区；

使所述引物延伸产物与捕获寡核苷酸杂交，所述捕获寡核苷酸包括捕获部分；和

使用结合剂选择性捕获所述引物延伸产物，所述结合剂与所述捕获部分选择性结合。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述捕获寡核苷酸包括与所述引物延伸产物的所述单链区的至少一部分实质上互补的序列。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述捕获寡核苷酸包括与所述第一引物序列的至少一部分实质上互补的序列。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述延伸在显著高于所述第一Tm的温度下执行，使得所述引物的所述第一和第二引物序列不与彼此实质上杂交。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述引物延伸产物在显著低于所述第一Tm的温度下与所述捕获寡核苷酸杂交，使得实质上全部未延伸的寡核苷酸呈防止与所述捕获寡核苷酸杂交的形式。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述引物包含发夹、分叉或茎环引物。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述捕获寡核苷酸与所述引物延伸产物相比以有限浓度提供。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述捕获寡核苷酸与所述结合剂相比以有限浓度提供。

9.一种用于从样品分离特定量的核酸的方法，其包含：

通过使包括一群标靶核酸分子的样品与限制数目的捕获寡核苷酸在其中所述捕获寡核苷酸中的至少一些与所述标靶核酸分子中的至少一些杂交的条件下接触，来产生一群结合的标靶核酸分子；和

通过捕获相当大部分的所述结合的标靶核酸分子群体，来形成一群捕获的标靶核酸分子，其中捕获的标靶核酸分子的数目与捕获寡核苷酸的所述限制数目成正比。

10.一种用于使两种或更多种核酸样品的数目正规化的方法，其包含：根据权利要求9所述的方法从第一样品形成第一群捕获的标靶核酸分子，和根据权利要求9所述的方法从第二样品形成第二群捕获的标靶核酸分子，其中所述第一和第二群捕获的标靶核酸分子中的捕获的标靶核酸分子的数目从彼此变化不超过5倍。

11.一种用于使两种或更多种核酸样品的浓度正规化的方法，其包含：根据权利要求9所述的方法从第一样品形成第一群捕获的标靶核酸分子，和根据权利要求9所述的方法从第二样品形成第二群捕获的标靶核酸分子，其中所述第一和第二群捕获的标靶核酸分子中的捕获的标靶核酸分子的浓度从彼此变化不超过5倍。

12.根据权利要求9所述的方法，其中使所述标靶核酸分子群体在与所述捕获寡核苷酸杂交之前与引物接触，由此产生引物延伸产物。

13.根据权利要求9所述的方法，其中所述捕获寡核苷酸以限速浓度存在。