[发明专利]Salipro颗粒

说明书

技术领域

本发明涉及脂蛋白颗粒，其用作疏水试剂(如疏水性药物或膜蛋白)的递送或载体系统，本发明还涉及用于制备该盘状脂蛋白的方法。

背景技术

膜蛋白和疏水性的化合物非常难以处理，并且制药和生命科学研究和应用中具有两个主要的挑战：(i)为不可溶的疏水化合物或膜蛋白提供在水溶液中的可溶性，以及(ii)将这类疏水性物质作为治疗剂和诊断剂施用。

膜蛋白由全部ORF的大约30％编码(参见文献“WallinandvonHeijne,ProteinScience1998Apr；7(4):1029-38”)，并且由于大部分(即，大于60％)药物实际上靶向这类蛋白，因此其代表了一类重要的药物靶点(参见文献“Overingtonetal.,NatureReviewsDrugDiscovery5,993-996(December2006)”)。膜蛋白在许多生物过程中发挥重要作用，如信号转导、分子和能量运输、识别和细胞通讯。然而，当将膜蛋白从其天然脂双层环境中提取出来后，膜蛋白由于其不溶性和趋于聚集的性质而难以研究。为了维持膜蛋白的完整性，需要人造的疏水环境。在此，去垢剂胶束是最常使用的，然而其会对生物相容性产生负作用，能够对膜蛋白的活性产生不利影响，并且可能会干扰检验的实验条件。

另一个主要的药理学挑战是，施用和递送疏水性化合物和/或疏水性蛋白作为治疗剂或诊断剂。由于这些疏水性试剂的溶解度有限，它们趋于聚集，这将导致局部药物颗粒浓度高，从而会导致高的毒性、不希望的免疫反应，并且会使药物失活(参见文献“AllenandCullis,SCIENCE,303(5665):1818-1822,MAR19,2004”)。

因此，非常需要将诸如膜蛋白、药物或诊断化合物等疏水试剂纳入可溶性的颗粒中的应用。目前，解决这两个挑战的方法主要涉及脂质体和重组高密度脂蛋白(rHDL)颗粒(参见文献“ChanandBoxer,CurrentOpinioninchemicalBiology11:1-7,2007”)。

EP1596828B1公开了盘状生物活性试剂运送颗粒，包含以双带样形式紧密包围脂双层的载脂蛋白。上述颗粒的内部由脂双层的疏水区域形成。这与具有含水内部的封闭球状双层壳的脂质体不同。EP1596828B1中公开的盘状生物活性试剂运送颗粒的斯托克斯直径约为10nm，并且提出了将其用作疏水性药物如两性霉素B或喜树碱的递送载体。

EP1345959B1公开了相似类型的直径约10nm、高度约5.5nm的纳米颗粒。该颗粒为盘状，并且由(i)人工膜脚手架蛋白、(ii)磷脂双分子层和(iii)至少一种疏水性或部分疏水性膜蛋白组成。所述膜脚手架蛋白也以双带样式包围脂双层，并且是人载脂蛋白A-1的衍生物或截短形式，缺少人载脂蛋白A-1的N-末端球状结构域，其是两亲性的并且形成至少一个α螺旋，并且在水环境中会与磷脂或磷脂的混合物自组装成所述盘状的纳米颗粒。这种工程化的膜脚手架蛋白(MSP)将为纳米级盘状脂蛋白颗粒提供稳定性、尺寸均匀性以及有用的功能性。

然而，目前可用的纳米盘技术存在一些缺点，例如，在颗粒的组装过程中需要去除去垢剂。除此之外，在现有技术的方法中，由载脂蛋白衍生的MSP的紧密双带样形式提供的尺寸均匀性似乎导致了这样的代价：固定的最小颗粒尺寸，和限制了可获得的最大直径。

鞘脂激活蛋白(saposin)家族包括4种小(大约80个氨基酸)蛋白，包括鞘脂激活蛋白A到D，其与脂结合和/或相互作用，并且在鞘脂代谢中作为一些溶酶体酶的重要辅因子(参见“Bruhn,BiochemJ.(2005)389,249-257”和其所引用的文献)。据描述，鞘脂激活蛋白更偏好带负电荷的脂质和低pH值，在酸性pH环境中显示出明显提高的活性，最佳pH值为溶酶体内4.75的pH值。鞘脂激活蛋白A、B、C和D由单一的大的前体蛋白鞘脂激活蛋白原(prosaposin)通过蛋白水解作用水解而得。已经报道了鞘脂激活蛋白A、B、C和D的完整氨基酸序列、以及鞘脂激活蛋白原的基因组结构和cDNA序列(请参见“O'Brienetal.(1988)Science241,1098-1101；Furst等(1992)BiochimBiophysActa1126:1-16”)。