[发明专利]生产免疫偶联物的方法

说明书

本发明提供制备活性免疫偶联物、包括抗CD22免疫偶联物的方法。合适地，该方法包括分批进料再折叠过程和/或柱剥离过程，相比未利用该方法的其他过程这些过程使得免疫偶联物产率增加。

发明背景

发明领域

本发明提供制备活性免疫偶联物、包括抗CD22免疫偶联物的方法。合适地，该方法包括分批进料过程和/或柱洗脱过程，相比未利用该方法的其他过程这些过程使得免疫偶联物产率增加。

背景技术

大规模、经济的蛋白质纯化是生物制药行业生产中的一个重要因素。治疗性蛋白质典型地是使用原核或真核细胞系产生的，这些细胞系经过工程化处理以表达来自一种重组质粒的感兴趣的蛋白质，该质粒包含编码该蛋白质的基因。将所希望的蛋白质从被送至细胞的组分和细胞副产物的混合物中以足够纯度(例如足以用作一种人类治疗物的纯度)进行分离由于多个原因对生物制品制造商提出了严峻的挑战。

基于蛋白质的药物产物的制造商必须遵守严格的监管标准，包括极为严格的纯度要求。为了确保安全性，监管机构(如美国食品与药品监督管理局(FDA))要求基于蛋白质的药物产品基本上不含杂质，包括与产物相关的污染物(如聚集体)、该重组蛋白的片段和变体以及与过程相关的污染物(如宿主细胞蛋白、培养基组分、病毒、DNA以及外毒素)。尽管在生物制药行业可以获得并广泛使用不同的蛋白质纯化方案，但他们典型地包括一个亲和纯化步骤，例如对于抗体而言进行蛋白A纯化，以便达到药学可接受的纯度。

开发一个可适用于特定生物分子和不同生物分子两者的纯化方案(该方案是成规模的、可控的，并且提供了高产率的纯化生物分子)将允许在整个药物开发过程的非常早期的阶段将其整合至产品开发过程中。因此，令人希望的并且有利的是提供简单且有效的过程，该过程能产生具有高质量和高安全性的药物物质。

发明概述

在一个实施例中，提供制备活性免疫偶联物的方法。合适地，该免疫偶联物在一个或多个残基处脱酰胺化，并且该脱酰胺化作用导致该免疫偶联物效力的抑制。合适地，该方法包括在分批进料过程中再折叠该免疫偶联物并且在一个或多个色谱柱上纯化该再折叠的免疫偶联物。

在制备活性免疫偶联物的其他实施例中，其中所述免疫偶联物在一个或多个残基处脱酰胺化，并且其中所述脱酰胺化作用导致所述免疫偶联物效力的抑制，该方法包括再折叠所述免疫偶联物并且使用双循环洗脱在离子交换柱上纯化该再折叠的免疫偶联物，其中在第一次洗脱和第二次洗脱之间利用剥离缓冲液剥离该柱，该剥离缓冲液包含乙醇胺、精氨酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、尿素以及二硫苏糖醇(DTT)。

在该方法的实施例中，再折叠该免疫偶联物包括具有9.5或更小的pH的再折叠缓冲液。

合适地，该免疫偶联物包含抗体或其抗原结合片段，例如抗体或抗原结合片段包括Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、单链Fv或scFv、双硫化物连接的Fv、V-NAR结构域、IgNar、内抗体(intrabody)、IgGΔCH2、迷你抗体、F(ab')3、四体抗体(tetrabody)、三体抗体(triabody)、双体抗体(diabody)、单一结构域抗体、DVD-Ig、Fcab、mAb2、(scFv)2、或scFv-Fc。

在示例性中，该抗体或抗原结合片段结合细胞表面受体，合适地是CD22。

合适地，免疫偶联物包含毒素，例如毒素包括但不限于绿脓杆菌外毒素、蓖麻毒素、相思豆毒素、白喉毒素及其亚单位，连同肉毒杆菌毒素A至F和变体、以及它们的衍生物。

在示例性实施例中，该毒素是绿脓杆菌外毒素或其变体，它合适地具有选自下组的氨基酸序列，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:16至22。

在实施例中，该抗体或其抗原结合片段包含VH和VL序列，合适地该VH序列选自下组，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:6至11，并且该VL序列选自下组，该组由以下各项组成：SEQ ID NO:2以及12至15。