[发明专利]利用人副流感2型病毒载体的疫苗

权利要求书

1.病毒载体，是在副粘病毒科的缺失了F基因的人副流感2型病毒的基因中整合有编码抗原多肽的基因的病毒载体，其特征在于，

所述病毒载体获得来自Vero细胞的F蛋白质的供给，所述Vero细胞表达副流感2型病毒的F基因或与抗原融合的F基因，所述抗原多肽以与病毒的选自HN蛋白质和F蛋白质中的任一种或两种以上的结构蛋白质或它们的一部分融合的融合蛋白质的形式而表达，并且，

1)所述编码抗原多肽的基因配置于HN基因的正义链的3’末端侧，抗原多肽在载体被膜的外部表达；

2)所述编码抗原多肽的基因配置于F基因的正义链的3’末端侧，抗原多肽在载体被膜的内部表达；或

3)所述编码抗原多肽的基因分别配置于HN基因的正义链的3’末端侧及F基因的正义链的3’末端侧，抗原多肽在载体被膜的外部和内部两方表达。

2.病毒载体，是在副粘病毒科的缺失了F基因的人副流感2型病毒的基因中整合有编码抗原多肽的基因的病毒载体，其特征在于，

所述编码抗原多肽的基因配置于编码F基因的膜内区域的序列的正义链的5’末端侧，获得来自表达副流感2型病毒的F基因的Vero细胞的F蛋白质的供给，使抗原多肽与作为病毒包装信号的F膜蛋白质的膜·细胞内结构域融合并表达，将抗原多肽保持在载体被膜上。

3.如权利要求1或2所述的病毒载体，其中，病毒为经核酸灭活处理的病毒。

4.如权利要求3所述的病毒载体，其中，核酸灭活处理不实质性地改变病毒被膜的结构。

5.如权利要求1或2所述的病毒载体，其中，抗原多肽为流感病毒的M2e蛋白质或其片段。

6.如权利要求1或2所述的病毒载体，其中，抗原多肽为选自由下述病毒的抗原肽、下述细菌的抗原肽、支原体的抗原肽或癌抗原gp100、MUC1、NY-ESO-1、MelanA/MART1、TRP2、MAGE、CEA、CA125、HER2/neu、WT1及PSA组成的组中的任一种或两种以上、或它们的片段，所述病毒选自包括强毒型流感病毒在内的流感病毒、副流感3型病毒、RS病毒、亨德拉病毒、SARS病毒、尼帕病毒、拉沙病毒、登革病毒、西尼罗病毒、人偏肺病毒、埃博拉病毒、汉坦病毒、艾滋病病毒、C型肝炎病毒、拉沙病毒、人乳头瘤病毒、风疹病毒、轮状病毒、诺如病毒、刚果-克里米亚出血热病毒、疱疹病毒、巨细胞病毒及乳头瘤病毒，所述细菌选自A组β型溶血性链球菌、结核分枝杆菌及霍乱弧菌。

7.制造缺失了F基因的人副流感2型病毒载体的方法，其特征在于，所述病毒载体中，抗原多肽以与病毒的选自HN蛋白质和F蛋白质中的任一种或两种以上的结构蛋白质或它们的一部分融合的融合蛋白质的形式表达，所述方法包括下述各工序：

将在不表达内源性F蛋白质基因的人副流感2型病毒中整合有编码所述抗原多肽的基因的病毒载体与Vero细胞共培养，所述Vero细胞表达副粘病毒科病毒的F基因或已与抗原融合的F基因；

然后从培养上清液中分离病毒颗粒，

其中，抗原多肽如下进行表达，

1)以融合于HN蛋白质的C末端侧的方式在载体被膜的外部表达，

2)以融合于F蛋白质的C末端侧的方式在载体被膜的内部表达，或

3)以分别融合于HN蛋白质的C末端侧及F蛋白质的C末端侧或HN蛋白质的N末端侧的方式在载体被膜的外部和内部两方表达。

8.制造缺失了全长F基因的人副流感2型病毒载体的方法，所述病毒是在副粘病毒科的缺失了F基因的人副流感2型病毒的基因中整合有编码抗原多肽的基因的病毒载体，

其特征在于，抗原多肽与病毒的F蛋白质的膜·细胞内区域融合，所述抗原多肽在载体被膜上表达，

所述方法包括下述工序：

将在不表达内源性F蛋白质基因的人副流感2型病毒中整合有编码所述抗原多肽的基因的病毒载体与Vero细胞共培养，所述Vero细胞表达人副流感2型病毒的F基因，

然后从培养上清液中分离病毒颗粒。