[发明专利]利用人副流感2型病毒载体的疫苗

说明书

本发明公开一种病毒载体及其制造方法，所述病毒载体是在人副流感2型病毒基因中整合有编码抗原多肽的基因的病毒载体，所述病毒载体中，抗原多肽以与病毒的结构蛋白质融合的融合蛋白质的形式表达。本发明的病毒载体中，在病毒颗粒上定量地大量包含抗原肽，能够高效地将抗原多肽运送至靶细胞。

技术领域

本发明涉及可作为用于预防或治疗疾病的疫苗使用的RNA病毒载体及灭活疫苗。

背景技术

副粘病毒科的病毒具有负单链RNA作为基因组，已制作出了能够利用逆向遗传学方法高度表达外源基因的载体，认为其具有作为基因治疗用载体或基因重组疫苗用载体的优异特性。由于病毒的生命周期不包含DNA期(DNA phase)，并且转录·复制全部在处于核外的细胞质中进行，因此，与染色体DNA发生同源性重组的概率极小，由于对染色体的基因重组而致癌的风险小。

目前为止，本申请的发明人试图将人副流感2型病毒(其为负单链RNA病毒，属于副粘病毒科副粘病毒亚科腮腺炎病毒(Rubulavirus)属，下文记作hPIV2)载体化，研究了其作为疫苗及基因治疗用载体的应用。

在研究过程中，构建了F基因(病毒的结构蛋白质)完全缺失了的、hPIV2的F基因缺失型载体。该载体具有非传播性(non-transmissible)或单轮感染性(single-round-infectious)的特性。此外，还成功获得了具有高效价(high titer)的载体产生能力的稳定表达F基因的包装细胞，该细胞可用于F基因缺失型载体的生产。缺失F基因的该载体，仅能在表达有F基因的包装细胞中产生将F蛋白质保持于病毒被膜上的感染性载体。另一方面，在不表达F基因的细胞·组织中，尽管发生所谓的自身复制(self-replication)，但不能产生感染性的载体，因此，载体不会在受体中无穷尽地增殖，可以认为其安全性较高(专利文献1)。

已报道了许多使用基因重组RNA活病毒载体或弱毒化RNA重组病毒的疫苗或基因治疗在非临床试验、临床研究、临床试验等中显示出有效性的结果(非专利文献1～9)。但是，目前还没有报道被美国食品药品监督管理局及欧州药品厅批准为药品的基因重组活(live)RNA病毒载体制剂。推测其理由为：使用基因重组的活RNA病毒作为载体时，虽然采取了利用弱毒化病毒以降低病原性、或利用非传播型载体等安全层面上的对策，但在感染细胞内仍大量产生病毒及外源基因产物，因此不能彻底消除对恒常性(homeostasis)的影响或外源基因的突变等的忧虑。

因此，可以说将基因组灭活或分解为组分(component)从而使病毒不进行转录·复制的疫苗的安全性较高。灭活疫苗的制作多采用使用福尔马林的处理方法。

但是，被认为安全性较高的灭活疫苗也存在安全性上的问题。20世纪60年代开发出了针对属于副粘病毒科的RSV的、利用福尔马林获得的灭活RSV疫苗，接种该疫苗后，由于RSV的自然感染，导致婴幼儿中出现了重症患者和2名死亡者。之后全力进行了对其原因的阐明。发现了利用福尔马林对病毒进行灭活处理导致F膜蛋白质的立体结构发生变化。发现：通过接种该疫苗，产生的是不具有对改性后的F膜蛋白质的中和活性的抗体，而由于经过福尔马林处理而不存在正常结构的F膜蛋白质，却没有产生对该蛋白质具有中和活性的抗体。并且，认为在接种该疫苗后，由于RSV病毒的自然感染，使得机体反应欲要抑制病毒的增殖时，将过量产生没有中和活性的抗体。结果，在通常的RSV感染中观察不到的那样多数的嗜酸性粒细胞浸润至肺组织，随之IL-4、IL-5等细胞因子升高，也不能诱导局部IgA抗体、细胞免疫，从而引起了重症化。

此外，已知福尔马林灭活RSV使树突状细胞(其为抗原呈递细胞)成熟的能力比活RSV差，故研究了利用不使用福尔马林的UV处理、热处理等进行的灭活，但无论采用哪种处理，将树突状细胞活化的能力均较低，并且还诱导炎症反应，因此未实现实用化。同 样地，对于属于副粘病毒科的麻疹病毒的福尔马林灭活疫苗，也报道了嗜酸性粒细胞的浸润和异型麻疹。